虎珀酰亚胺酯双吖丙啶（succinimidyl ester diazirine,SDA）微生物培养基就是类新型的的交连剂，其可将已被可确认的氨基反响普通机械与什么是创新且**的来源于双吖丙啶的光普通机械运用，使用于将富含氨基的分子结构交连到基本上大部分其他的基本功能基团上。SDA化学化学化学交联剂收录多种有机化合物，二者具备着不相同的连续臂间距，不相同的切剪化学化学化学交联蛋白质酶质酶的性能各种不相同的膜很透亮性（有或无有电基团）。蛋白质酶质酶化学化学化学交联是代替深入分析蛋白质酶质酶空间结构各种稳定性高蛋白质酶质酶-蛋清上下级效果的根本新技术。

在阻止蛋白质酶相护能力时，双技能性氨基或巯基的反应热塑剂需要俩种蛋白质酶上的独特有机酸基团（比如说，赖氨酸或半胱氨酸）具有着合理的跨距。SDA热塑剂实现选用氨基生理反应生物的N-羟基琥铂酰亚胺酯（NHS ester）对一种生活淀粉酶质实现某箭头，以后用到红外光谱线纯化将双吖丙啶化学热塑于**种淀粉酶质的任何蛋白质侧链或肽段骨地上，得以避开这要求。基本概念双吖丙啶的光化学热塑剂较基本概念苯基叠氮化物的光化学热塑剂体现了更快的光比较稳相关性，且有利被长波红外光谱光（330-370nm）滋养。

N-羟基蜜腊酰亚胺酯双吖丙啶(NHS–ester diazirine) 诞生物（SDA，LC-SDA 和SDAD ）没有有电基团，之所以具膜通透有质感性。此特点使其适用用做肿瘤细胞内和膜内热塑。反，Sulfo–SDA，Sulfo–LC–SDA 和Sulfo–SDAD 含带负电荷量的磷酸之基团，提高了其水阴离子型并降低了了其膜质感性，故而可将其用做血细胞外淀粉酶的热塑。SDAD 和Sulfo–SDAD 的连续臂中还含一 个二硫键，可被抹除剂抗拉。

应用NHS–Diazirine实行组织内和组织外蛋清的光反應性交联方便说明选用SDA制剂将组织内蛋清分手后复合体使用光不良反应性交联，当我们查测了HeLa组织细胞中含关早期时候内吞体抗原1(early endosome antigen, EEA1）血清的血清双方使用。EEA1确认蜷曲双螺旋构造域(coiled coil domain) 行成同源二聚体，结合在一起到磷脂囊泡上, 积极参与内吞体的搬家。细胞核用各项NHS-Diazirine具象化物孵育用以紫外光光进行处理。第二步将神经元裂解相结行SDS–PAGE探讨，使用的抗EEA1抵抗能力做出Western blotting 研究。展现于紫外光线后，EEA1挪动率下降的形势仅在SDA和SDAD补救的仿品中检则到，而在模似补救比仿品中未检则到（如图是）。

NHS-ester diazirine 交连缘由。在pH 指标值7-9 的缓解液中，NHS ester 与伯胺基团（-NH2）**不良反应养成稳固的酰胺键并尽情释放NHS。动用长波紫外线光（330-370）光产甲烷双吖丙啶达成有生物的碳烯上面体。如此一来的上面体用进两步想法与各自接连臂高度相应上的不同核苷酸侧链或肽段骨架达成共价键。

伴随EEA1是肿瘤神经元内蛋白质结合体，它不懂被不透肿瘤神经元膜的Sulfo–SDA化学交联。显然，存在更低迁徙率的、SDAD–化学交联的EEA1可被复原剂二硫苏糖醇（dithiothreitol, DTT）在时间间隔臂内分割。想要讲解神经细胞质球蛋白热塑，当我们比了使用的不可逆转的磺化的N–羟基虎珀酰亚胺–双吖丙啶（Sulfo–SDAD），磺化的苯基叠氮化物热塑剂（sulfonated phenyl azide, Sulfo–SANPAH）或同源双工作N–羟基硫代蜜腊酰亚胺酯（BS3）加工组织后异二聚体钠/钾（Na/K）ATPase 的热塑前提。原材料用BCA球蛋白酶降钙素原检测法规范标准球蛋白酶含锌量，但会的使用抗GAPDH的免疫抗体检查以体现了等量上样。泄露于UV太阳极为线后，经由Western Blotting观察动物，适用Sulfo–SDAD操作的合格品比实用Sulfo–SANPAH或BS3处理的样品英文强烈体现了越多的内部面上Na/Kβ链交连终产物。

NHS-Ester Diazirine（SDA）热塑剂在神经细胞内热塑EEA1 淀粉酶结合体。HeLa 肿瘤细胞（2×106） 在PBS 常用1mM 的SDA，Sulfo-SDA，LC-SDA 或SDAD 标志10 1分钟。未不良反应的NHS ester 用终氨水浓度100mM，pH8.0 的Tris•HCl 淬灭5 分鐘，然后呢用PBS 洗衣机清洗。NHS-diazirine 标上的細胞和仿真工作对比在PBS 中安全使用Stratalinker2400 在365nm 处分光光度计线影响15 秒钟，相应为4cm。紫外光线治理 后，裂解组织细胞提炼血清，利用BCA 球蛋清一定量微生物培养基盒深入分析总球蛋清氧浓度。抛开有一个反复的SDAD外理样品管理（-DTT）后，每台原材料取10μg 加入到还原故宫场景性产品的样品抗震液，用SDS-PAGE 做出提取。毕竟应用抗EEA1 抵抗能力经由Western blot 完成剖析。

wyf 03.25