fitc荧光染料激发发射波长是多少?Fitc的使用方法介绍!
fitc荧光染料激发发射波长是多少?Fitc的使用方法介绍!
FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫氰酸荧光素)一种經典且比较广泛在使用的浅绿色荧光颜料,在免疫检测学、组织内部微微生物体学和微微生物体物理调查中被中用标记符号表面抗原、蛋白酶质、多肽、寡核苷酸等,适用荧光显微镜、免疫印迹组织内部术(FACS)、ELISA和繁多微微生物体三维成像。基本信息
中文字幕称呼:异硫氰酸荧光素英语缩略词:FITC鼓励可见光波长(Ex):约 495 nm放射光波长(Em):约 519–525 nm荧光字体颜色:环保分子结构量:约 389.4 Da(FITC-NH2);依赖症于表达主要形式降解性:可互溶DMSO、DMF、一少部分有机化学液体;低水无水磷酸氢化学结构与偶联机制
功能键基团:异硫氰酸基(–N=C=S)目的措施:可与怪物分子式的伯胺(–NH₂)再次发生共价响应,经常用到于抗体阳性、淀粉酶质或多肽的标注。 
应用领域
表面抗原/球蛋白标示FITC通常用于免疫内部荧光实验室(IF)或流式内部内部术(FACS)中标公示记一抗或二抗,有利监视计划氧分子的展现与分布点。流式癌细胞癌细胞术图标神经元外观或胞内抗原,采用神经元临床诊断、凋亡讲解、催化活性考评等。荧光显微激光散斑可查测上皮细胞或组织结构中抗原的分析和展示,经过FITC图标表面抗原控制精彩纷呈数据信号表示。强有力的加密管控复染与同一荧光染色剂(如TRITC、DAPI、Cy5等)搭配组合适用于多通路显像实验室。DNA/RNA测试探针标出可与寡核苷酸接连,应用在FISH、交配测试电极和qPCR测试电极开放。✅ 优点
软件密切,有极高发育成熟的的使用组织体制费用低,不易得到 与基本上在线检测装置兼容(如电子显微镜、流式细胞术、酶标仪等)缺点和注意事项
光安稳力差:易被日照葡萄糖氧化,长的时间段大曝光会發生荧光淬灭,需闭光方法pH灵敏:荧光效果受pH会影响太大(在 pH 6.5~8.0 领域内较安全稳定)易油脂水解:异硫氰酸基团对水神经敏感,应现配现配荧光保修期短:数据坚持性较弱,痛感合长时程定位跟踪影像常见FITC衍生物
| 衍生产品物的形式 | 使用与表明 |
| FITC-NHS | 与伯胺(–NH₂)表现,普遍于表面抗原、蛋清标识 |
| FITC-dextran | 箭头多糖,广泛用于内吞实验室、膜南北通透性检则 |
| FITC-PEG | 标上聚乙二醇原子核,加强水可溶性、不稳性 |
| FITC-avidin/streptavidin | 与微生物素操作系统配合默契利用,打造加测游戏平台 |
与其他绿色荧光染料比较
| 颜料 | 促进/导弹发射可见光波长 (nm) | 光维持性 | 特质 |
| FITC | 495 / 519 | ★★ | 制造费低,易更改,光稳定可靠性欠佳 |
| Alexa Fluor 488 | 495 / 519 | ★★★★★ | 更强数据信号,最高光稳定的性 |
| GFP(绿荧光蛋白质) | ~488 / ~509 | ★★★★ | 显性基因简码表达爱型性子,适用活组织细胞 |
抗体FITC标记操作简要流程(NHS酯法)
析出FITC-NHS于DMSO(禁止水)将核苷酸质混溶碱性食物抗震液(如0.1 M NaHCO₃,pH 8.5)按基数加盟FITC-NHS悬浊液(寻常摩尔比是5~20:1)阴凉孵育1半小时使用的透析或妇科凝胶筛选柱祛除矿酸FITC测得标记图片能力(进行光密度计算公式比OD495/OD280)总结
FITC 也是种非常经典、有效率且经济增长的荧光活性染料,符合于许多生物技术标识检查测量。它的草绿色荧光表现模糊、易检查测量,但在日照和pH生活条件下需调节,適合临时性看检查测量和标准标识。

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