DSPE-PEG2000-TCO 与 Tetrazine 修饰分子的偶联实验方案或构建脂质体修饰方法

下方是 DSPE-PEG2000-TCO 与含 Tetrazine（四嗪）官能团碳原子的偶联实验室方案怎么写，可用到建设方案靶向疗法脂质体、納米粒、单单从表面淡化软件平台等用途。 

实验名称

DSPE-PEG2000-TCO 与 Tetrazine-系统原子核的生物体正交偶联不良反应研究 

一、实验目的

利用反式环辛烯（TCO）-四嗪（Tetrazine）微生物正交生理反应，将 DSPE-PEG2000-TCO 与含 Tetrazine 的小分子式、淀粉酶质或荧光电极等确定尽快、提高效率、特异形的共价偶联，构造 靶点功能表脂质板材或奈米软件。 

二、材料与试剂

种类	尺寸	表示
DSPE-PEG2000-TCO	≥95%，颗粒或2 mg/mL 溶剂	脂质-聚合反应物遮盖剂
Tetrazine 突显分子式（如 Tetrazine-荧光探头、Tetrazine-兼容体）	可易溶水或DMSO	应要具备亲水溶性与任务快速精确程度
PBS减慢液（pH 7.4）	1×，无菌检测过滤清洁	始终保持生理性生理反应条件
DMSO（如果需）	阐述纯	降解 Tetrazine 原子
反渗透装置抽滤管（MWCO 10 kDa）	0.5 mL/2 mL	纯化发应化合物

 

三、实验步骤

① 表现准备好将 DSPE-PEG2000-TCO 可溶性高，溶于水的于 PBS 或泥中，氧化还原电位设制为：0.5–1 mg/mL将 Tetrazine-体现分子结构消融于 PBS 或者量 DMSO 中（提高认识 DMSO 含碳量不超过了总体布局系的 5%）按摩一下尔比 1:1.2（TCO : Tetrazine）混两种② 反响生活条件温度因素：25°C（温度）的反应时候：15–60 钟头（通常情况下30钟头够了）阴凉运行：TCO 和有些 Tetrazine 测试探针对光过敏③ 代谢物纯化利用 反渗透装置离心法（10 kDa 虚报冒领） 删去未体现的游离于 Tetrazine 测试探针；可会根据的主要用途进的一步纯化（如透析、SEC）或使用在险遭脂质体融合。 

四、结果表征（可选）

方法步骤	种类
紫外线-隐约可见挥发光谱仪（UV-Vis）	区分测试探针需不需要完美偶联
各式各样光散射（DLS）	若适用脂质体，测量粒度变幻
傅里叶红外光谱仪（FTIR）	认证共价键生成（可以）
荧光光谱仪或激光散斑	若偶联荧光测试探针，可以于模块验正

 

五、应用延伸

1. 建设方案脂质躯干部面功能性化：将 DSPE-PEG2000-TCO 立足脂质体（与DSPC、甘油三酯交织，塑料薄膜水化法）如果添加 Tetrazine-的功能原子核，可以在脂质躯干部面不良反应最快偶联，不能不崔化，不能不高温高压2. 建设方案组织细胞结构标记图片检测器：将 DSPE-PEG2000-TCO 参与内部养育液，镶入内部膜以后倒入 Tetrazine-荧光探头，如要图标组织外观 

注意事项

項目	意见与建议
遮光操作的	TCO 和 Tetrazine 对光特别敏感，个人建议闭光症状
不宜温度	以防 >40°C，TCO 会挥发
解决空气氧化	可充氮导出，TCO 对氧也较的敏感
实时运用副产物	有机物建议大家同一天在使用或温度维持（-20°C）

 

相关反应背景

这类 TCO-Tetrazine 应属 SPAAC（Strain-Promoted Inverse-Electron-Demand Diels–Alder Cycloaddition）；不用办理催化反应剂，对活内部、进行友爱；常常用于纳米级素材修饰语、蛋白质偶联、原位标出、用药递送。

关于我们 ：

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