FITC-D-Lys 合成步骤详解

一、反应原理

异硫氰酸荧光素（FITC）的异硫氰酸酯基（-NCS）与 D-赖氨酸的 ε-氨基（-NH₂）在是碱性的媒介中的发生亲核增益反馈，进行增强的硫脲键（-NH-CS-NH-），导出 FITC-D-Lys 荧光产生物。

二、实验步骤

原料准备‌

FITC 水溶液配好的凉茶‌：将 FITC（1-5 mg/mL）溶于于无水 DMSO 中，遮光保持。D-赖氨酸饱和溶液自制‌：将 D-赖氨酸容解于 0.1 M 碳酸氢钠缓存数据液（pH 8.5）中，保证 氨基趋于去质子化活力性壮态。

偶联反应‌

在背光情况下，将 FITC 氢氧化钠液体慢慢地滴入至 D-赖氨酸氢氧化钠液体中，掌握 ‌FITC/D-赖氨酸摩尔比‌ 为 1:1 至 1:2（会按照标记符号硬度需要量调准）。空调温度下不断地绞拌影响 ‌1-2 钟头‌，经过 ‌pH 保护 8.5‌ 确定影响高效率的做出。生理反应中止与纯化‌撤销发应‌：顺利通过超滤膜离心分离或透析（挪用原子核量 3.5 kDa）取除未发应的存在 FITC。中级纯化‌：凝露滤水层析（Sephadex G-25 柱），脱离 FITC-D-Lys 与未偶联的小氧分子沉渣。二级考试纯化‌：反相高效、性价比最高色谱仪色谱（HPLC，C18 柱），流通相为甲醇-水均值模式，汇集指标生成物峰。

三、质量控制与保存

色度加测‌：经过 HPLC 深入分析色度（≥95%）及质谱查证氧分子量。永久储存经济条件‌：乙酰乙酸冻干后于 -20℃ 闭光储存，不要出现冻融；消融时为先施用 DMSO 或 PBS（pH 7.4）。最为关键的参数指标与改进改进措施性能指标 配置范围之内 seo最终目标pH‌ 8.0-9.0（强碱缓冲区液） 完善 FITC 生理反应活性酶摩尔比‌ FITC=1:1-1:2 稳定平衡符号错误率与总成本的反應准确时间‌ 1-2 1天 防止出现 FITC 溶解副的反應

注意事项

闭光运行‌：FITC 对光灵敏，新线路需要符合粽色玻璃纸器物或遮光的条件下确定。高沸点溶剂考虑‌：慎防利用含伯胺制剂（如 Tris 缓冲区液），慎防竞争者性作用侵扰。生物体相溶性自测‌：若中用活肿瘤体细胞调查，需验证通过终终产物的肿瘤体细胞渗透性（如 CCK-8 法）。采用所述步奏，可效率高获得高溶解度 FITC-D-Lys，需要满足核氨基酸标识、有害菌显像等不同学习所需。大于的资料由网编zhn提拱，仅在教学科研

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