FITC-D-Lys 合成步骤详解

一、反应原理

异硫氰酸荧光素（FITC）的异硫氰酸酯基（-NCS）与 D-赖氨酸的 ε-氨基（-NH₂）在酸碱度媒介中会出现亲核减伤生理反应，转换增强的硫脲键（-NH-CS-NH-），转换 FITC-D-Lys 荧光双重性物。

二、实验步骤

原料准备‌

FITC 溶剂调制‌：将 FITC（1-5 mg/mL）溶水于无水 DMSO 中，闭光同步保存。D-赖氨酸溶剂标定‌：将 D-赖氨酸融掉于 0.1 M 碳酸氢钠储存液（pH 8.5）中，抓好氨基地处去质子化抗逆性阶段。

偶联反应‌

在阴凉经济条件下，将 FITC 硫酸铜硫酸铜溶液比较慢加入适量至 D-赖氨酸硫酸铜硫酸铜溶液中，调节 ‌FITC/D-赖氨酸摩尔比‌ 为 1:1 至 1:2（跟据标出密度计算公式意愿调正）。空调温度下将持续拌和反應 ‌1-2 小时内‌，可以通过 ‌pH 达到 8.5‌ 确定反應高效率的来。化学反应停止与纯化‌停止作用‌：可以通过反渗透膜离心力或透析（公款私存团伙量 3.5 kDa）出掉未作用的自由 FITC。技师考试纯化‌：凝露脱水层析（Sephadex G-25 柱），破乳 FITC-D-Lys 与未偶联的小分子结构沉淀物。二次元纯化‌：反相快速高效液相色谱（HPLC，C18 柱），流入相为甲醇-水系数管理体制，收集整理受众乙酰乙酸峰。

三、质量控制与保存

色度测量‌：借助 HPLC 分析一下色度（≥95%）及质谱证实团伙量。保管水平‌：终产物冻干后于 -20℃ 背光保存图片，防止反反复复冻融；溶解完时优先级选择 DMSO 或 PBS（pH 7.4）。最为关键的参数设置与SEO优化最好是主要参数 制定空间 系统优化阶段目标pH‌ 8.0-9.0（偏碱性保护液） 升降 FITC 的反应渗透性摩尔比‌ FITC=1:1-1:2 均衡符号热效率与投资成本体现日子‌ 1-2 钟头 尽量不要 FITC 溶解副体现

注意事项

闭光操作步骤‌：FITC 对光特别敏感，一趟要在深褐色钢化玻璃盛器或遮光具体条件下确定。稀释剂的选择‌：不要在使用含伯胺免疫试剂（如 Tris 加载液），主要是防止竞争性性反馈串扰。生物技术相溶性測試‌：若在活组织测试，需检验终副产物的组织致癌性（如 CCK-8 法）。经由所诉操作步骤，可更高效制作而成高溶解度 FITC-D-Lys，考虑球营养物质标注、病毒影像等多重深入分析意愿。以内信息由彩色哥zhn打造，仅应用于教学科研

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