fitc荧光纺织染料鼓励使用光谱是什么?Fitc的采用形式分享!
FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫氰酸荧光素)都是种原素且普遍选用的深绿色荧光染剂,在抗体阳性学、体细胞膜菌物学和菌物理学工作中被当做标记图片抗体阳性、球高蛋白、多肽、寡核苷酸等,于荧光显微镜、普鲁士蓝染色体细胞膜术(FACS)、ELISA和各样动物显像。
通常数据信息
汉语称呼:异硫氰酸荧光素
英语翻译缩略语:FITC
充分调动可见光波长(Ex):约 495 nm
使用主波长(Em):约 519–525 nm
荧光背景色:有机
碳原子量:约 389.4 Da(FITC-NH2);依靠于体现形态
混溶性:可混溶DMSO、DMF、少量出有机质高沸点溶剂;低水可溶
耐腐蚀格局与偶联原则
特点基团:异硫氰酸基(–N=C=S)
的作用逻辑:可与怪物团伙的伯胺(–NH₂)引发共价现象,选用于抗原、核氨基酸或多肽的标注。
软件业务领域
抵抗能力/球蛋白标出
FITC最常见于免疫力荧光测试(IF)或流式人体细胞人体细胞术(FACS)中标公示记一抗或二抗,便利侦测指标团伙的呈现与区域划分。
免疫印迹生殖细胞术
标识細胞外表面或胞内抗原,应用于細胞临床表现、凋亡阐述、抗逆性评定等。
荧光显微成相
可查重神经元或团体中抗原的固定和表答,依据FITC标出抵抗能力改变生态4g信号出现。
许多着色
与别的荧光活性染料(如TRITC、DAPI、Cy5等)结合使用于多短信通道影像实验操作。
DNA/RNA检测器标出
可与寡核苷酸拼接,用作FISH、混种杂交测试探针和qPCR探头开拓。
✅ 特点
软件非常广泛,具层面熟透的的使用体制
直接费用低,利于得到
与半数以上论文在线检测化兼容(如光学显微镜、普鲁士蓝染色、酶标仪等)
缺陷和考虑细节
光比较稳定能力差:易被日照时拆解,长时报光会發生荧光淬灭,需闭光进行
pH明感:荧光比强度受pH后果过大(在 pH 6.5~8.0 使用范围内较维持)
易电离:异硫氰酸基团对水敏感脆弱,应现配在用
荧光使用期限短:卫星信号连续性很差,沉重感合长时程跟踪三维成像
常考FITC研究物
ip产业物表现形式 | 用处与阐明 |
FITC-NHS | 与伯胺(–NH₂)发应,惯用于抗原、蛋清记号 |
FITC-dextran | 标出多糖,用来内吞实验所、膜透光性的检测 |
FITC-PEG | 标出聚乙二醇分子式,增进水可溶、可靠性 |
FITC-avidin/streptavidin | 与生物体素整体互相配合适用,营造的检测服务平台 |
与另外的健康荧光染色剂会比较
染剂 | 鼓励/导弹光波长 (nm) | 光比较稳明确 | 显著特点 |
FITC | 495 / 519 | ★★ | 直接费用低,易了解,光安稳性较强 |
Alexa Fluor 488 | 495 / 519 | ★★★★★ | 更强信息,更高的光平衡性 |
GFP(草绿色荧光核蛋白) | ~488 / ~509 | ★★★★ | 隔代遗传简码形容型tag标签,适于活内部 |
抗原FITC图标的操作扼要流程图(NHS酯法)
溶解性FITC-NHS于DMSO(杜绝水)
将血清质不能溶解含碱储存液(如0.1 M NaHCO₃,pH 8.5)
按百分比申请加入FITC-NHS水溶液(基本上摩尔比是5~20:1)
闭光孵育1小
适用透析或妇科凝胶过滤清洁柱的还原游离态FITC
测试标志利用率(凭借光体积密度比OD495/OD280)
汇总
FITC 是种经典爱情、极有效率且第三产业的荧光染色剂,适合于种生物学标记符号试验。它的绿荧光的信号清楚、便于检则,但在日照和pH经济条件下需操控,非常适合短时间探究实验室和长规标注。