DSPE-PEG-VS 介导的抗体定向偶联策略
DSPE-PEG-VS 介导的免疫抗体定向培养偶联手段链接转换://www.cell.com/molecular-therapy-family/molecular-therapy/fulltext/S1525-0016(05)00162-0我们:安妮特 ·威尔逊,亨特,肖恩· 阿尔伯,唐志,史蒂文· 肯内尔,西蒙· 沃特金斯,叶 黄,布鲁斯· 皮特,宋丽 小结:肺内皮在长期保持日常肺脏顺利特点个方面充分发挥重在要用处,其特点心里阻碍与多重肺脏常见病有关的。进行反义寡脱氧核苷酸 (ODN) 矫正内皮特点心里阻碍依懒于搭建技术种可快速地将 ODN 递送回肺内皮且致癌性*小的递送的平台。因为,人们搭建技术了种的一种新型脂质的平台,可快速地将 ODN 靶向治疗递送回肺内皮。该措施因为种合理利用可阴亚铁离子化的氨基脂质(1,2-二油酰-3-二甲基丙烷铵)和含乙酸乙酯的缓解工作体系将一大批多聚阴阴亚铁离子 ODN 覆盖在脂质囊泡中的措施。内皮特女性朋友*体 (273-34A) 进行二硬脂酰磷脂酰乙酸乙酯胺-聚乙二醇隔断物被合并到脂质囊泡中。 273-34A*体在身体外和体里均能很好介导ODN递送回小鼠肺内皮组织。因此,该注射剂的满身给药拥有*低的血学致癌性,且可以说不想造成满身和肺脏血原因学的猛然变换。这么多結果为脂质介导的ODN递送于*肺脏常见病尊定了基本条件。因此,该措施还能作为定性分析肺内皮组织表观遗传特点的实验辅助工具。的材料和方式脂质和电化合物EPC、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N- [甲氧基(聚乙二醇)2000]、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺 (DSPE) 和 DODAP 购自 Avanti Polar Lipids, Inc.(美阿拉巴马州阿拉巴斯特)。CH、3-(2-吡啶二硫代)丙酸N-羟基虎珀酰亚胺酯 (SPDP)、二硫苏糖醇 (DTT)、大鼠 IgG 和革兰氏阴性菌(肠道杆菌)LPS 购自 Sigma-Aldrich(美密苏里州圣路易斯)。α-丁二烯基砜、聚乙二醇-丙酸的 ω- N-羟基虎珀酰亚胺酯 MW 3400 (NHS-PEG-VS) 购自 Shearwater Polymers(美阿拉巴马州亨茨维尔)。 DSPE-PEG-VS(MW 2507)决定前的方式合并[39]。*体食用大鼠*鼠TM (273-34A) 成为特异形配体,其分离纯化具体方法参看[30]。以合适大鼠IgG成为对比配体。大鼠*鼠ICAM-1单克隆*体YN1/1购自eBioscience机构(韩国加利福尼亚州殿堂亚哥)。Alexa Fluor-488羊*鼠IgG购自Molecular Probes机构(韩国俄勒冈州尤金)。寡核苷酸所以ODN均以硫代磷酸酯骨架人工,但应中用核酸酶阐述的ODN包括但不限于,该ODN以PO骨架人工(欧美德克萨斯州米德兰市米德兰认证服务生化试剂子公司)。应中用摄取量和规划研究探讨的ODN由Cy3记号的ODN与未记号的ODN构成,分配比例为1:4(w/w)。含ODN的脂质囊泡的制法安装Semple宋江因 [20]描术的步骤光催化原理含ODN的脂质囊泡。简所说之,在100%无水乙酸乙酯中光催化原理由EPC:CH:DODAP [25:52:20 (m/m)]构成的的脂质饱和液体。只为光催化原理*体靶点脂质囊泡,将3 mol%的DSPE-PEG-VS增添到脂质中。在单个的试管上,用300 mM柠檬汁百香果酸(pH 4.0)光催化原理ODN。打火饱和液体,之后将脂质饱和液体迟滞增添到ODN中,以至无水乙酸乙酯的*终氧浓度为40% (v/v)。ODN:脂质的投入比是0.15 (w/w)。将混物经由100 nm聚氨酯滤膜。将注射剂对pH 4.0的柠檬汁百香果酸盐抗震器液采取透析,齐头并进一部对pH 7.6的Hepes抗震器液采取透析。*后经由抑菌凝胶过滤系统将含带ODN的脂质囊泡与自由ODN隔离,并按学术论文[9]的步骤法测囊泡的长宽和ζ电势差。*体(Ab)硫醇化并与脂质囊泡偶联利用与SPDP作用提纯硫醇化*体。接下来用DTT治理 恢复原*体上的PDP基团。将具有DSPE-PEG-VS的脂质囊泡与硫醇化*体在22°C下孵育2一小时,接下来在4°C下孵育住宿,并缓缓的攪拌。利用疑胶油烟净化器弄掉未结合实际的*体。



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