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DOPE-PEG-Biotin在巨型单层囊泡膜构建中的应用研究
发布时间:2025-07-08     作者:kx   分享到:
文章:脂质膜上的颗粒拼装经由连接://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5笔者:卡斯帕· 范德韦尔1∙多丽丝 ·海因里希1,2∙丹妮拉·J· 克拉重夫特1节选:耐腐蚀品苯氯乙烯 (99%)、衣康酸 (99%)、4,4'-偶氮双 (4-氰基戊酸) (98%)、D-冬枣糖 (99%)、牛血清正蛋白质酶 (98%)、甲醇 (99.9%)、氯仿 (99%)、磷酸钠 (99%)、阳极氧化氘 (70%)、N-羟基磺化琥铂酰亚胺钠盐 (98%) 和 1,3,5,7-四甲基-8-苯基-4,4-二氟硼氮杂引达省苯 (97%, BODIPY) 购自 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO;甲氧基聚(乙二醇)胺 (mPEG, M W  = 5000) 购自 Alfa Aesar;氯化钠 (99%) 和叠氮化钠 (99%) 购自 Acros Organics; 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺稀盐酸盐 (99%),原于 Carl Roth;NeutrAvidin (*怪物制品素蛋白质酶) 和霍乱黑色素 B 亚基 Alexa Fluor 488 构建物 (霍乱黑色素 488),原于 Thermo Scientific;DNA 寡核苷酸 (怪物制品素-5′-TTTAATATTA-3′-Cy3),原于 Integrated DNA Technologies;相应原于Avanti Polar Lipids司的Δ9-顺式1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N-(怪物制品素基(聚乙二醇)-2000) (DOPE-PEG-怪物制品素)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙酸乙酯胺-N-(丽丝胺罗丹明B磺酰基) (DOPE-罗丹明)和G M1感觉神经节苷脂(GM1)。各种耐腐蚀品均按原样食用。各种工作均食用选用Millipore过虑体统(Milli-Q Gradient A10)拥有的电阻器比率为18.2 M Ω cm的去阴阳离子水。膜制取选取准则电开裂高技术制法的直径为 5 至 20  μm的超大型单双层囊泡 (GUV) ( 14 )。在氯仿中制法 2 g/L 的脂质混法物,其由 97.5 wt.% DOPC、2.0 wt.% DOPE-PEG-海洋生物素和 0.5 wt.% DOPE-罗丹明根据。收起来,取 10 μL该硫酸铜饱和稀硫酸在一块 6 cm2 的阳极氧化铟锡耐磨涂层载玻片上(15–25𝛺,Sigma-Aldrich),接着浸入在具有刺激性100 mM 红提葡萄糖注射液和0.3 mM 叠氮化钠的49:51 D2O:H2O硫酸铜饱和稀硫酸中。要让促进囊泡型成,将电*放置10 Hz 下1.1 V (rms) 电压值下不断地2钟头。将从此有的囊泡永久保存在空调温度牛血纯洁蛋白酶包被的小瓶中。要让遏制较小囊泡的数量统计,让我们在实用前随时实用Whatmann 5.0 μm直径氯化铵膳食纤维素油烟净化器器油烟净化器GUV 硫酸铜饱和稀硫酸( 15 )。对于那些膜管化实验设计,实用中枢神经节苷脂GM1和染剂霍乱内内毒素488非贸易膜小叶使用刺绣,内容如下所显示:将作出氯仿中的脂质混法物转意到甲醇中,生成0.2 wt.% GM1。接着按作出方式使用电开裂。产品的样品制法事先,将 50 mg/L 霍乱内内毒素 488 生成到磷酸二氢钠缓冲器盐硫酸铜饱和稀硫酸 (PBS) 中,仅对囊泡的表面使用刺绣。

DOPE-PEG-Biotin

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