Cy5-DOPE在细胞膜荧光示踪中的应用与特性分析
文献资料:具PD-1膜核蛋白的重构混杂神经细胞外囊泡使用胞质物货车辆跳转://www.mdpi.com/2072-6694/14/11/2635小编:石川拉贺†奥西德,吉田章介‡,泽田新一,佐佐木义弘和秋吉一成*节选:用料杆状宏病毒表明系统中常常用的秋粘虫Spodoptera frugiperda的Sf9动物神经细胞核系购自Invitrogen集团公司(美加利福尼亚州沃尔瑟姆)。HeLa神经细胞核购自JCRB Bank(欧美探析生物工程資源收藏中,欧美大阪)。 1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱 (DOPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸- L -丝氨酸 (DOPS)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸工业工业甲醇胺- N -(菁 5) (Cy5-DOPE)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸工业工业甲醇胺- N -(7-硝基-2-1,3-苯并恶二唑-4-基) (NBD-DOPE) 和 1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸工业工业甲醇胺- N -(丽丝胺罗丹明 B 磺酰基) (Rho-DOPE) 均购自 Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL, USA)。脂质机制备将DOPC、DOPS、NBD-DOPE、Rho-DOPE和Cy5-DOPE以其他的摩尔比在窗玻璃微管内的氯仿中相溶。在流失的氩气下化掉溶液,导致脂质膜。将膜移至涡流潮湿器中一晚,以完整避开氯仿。加如250 µL加载液(20 mM CH3COOH/CH3COONa(pH 4.5)或10 mM Tris-HCl(pH 7.5))使膜水合,并在27 °C下孵育一晚。用到徵型抽出机(Avanti Polar Lipids)将浮动液抽出100 nm钻孔大小的聚氨酯膜。用到磷脂C测试软件(Wako,印度大阪)旋光度的测试脂质质量有机废气浓度。简来讲之,磷脂酶D和胆碱硫化物酶从磷脂样件中形成过硫化物氢。形成的过硫化物氢在过硫化物物酶的效用下推进N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(DAOS)与4-氨基安替比林發生缩合现象,产生蓝色系有机颜料,依据旋光度的测试该有机颜料的吸光度,最后旋光度的测试样件中的磷脂质量有机废气浓度。