用于膜功能研究的DOPE-PEG-Biotin修饰巨型囊泡制备工艺
专著:脂质膜上的水分子装配经过链接代码://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5作家:卡斯珀·范德韦尔1 ∙ 多丽丝·海因里希1,2 ∙ 丹妮拉·J·克垃夫特1 节选:膜提纯确定规定电收缩技能(14)备制了直径怎么算在5至20毫米内的巨乌贼编织成单层囊泡(GUVs)。在氯仿中自制了2克/升的脂质搭配垃圾物,至少一般包括97.5质量%的二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、2.0质量%的聚乙二醇-聚氧氯乙烯醚-怪物素(DOPE-PEG-biotin)和0.5质量%的聚乙二醇-罗丹明(DOPE-rhodamine)。现在来,在俩个6平方和多厘米的腐蚀铟锡涂覆载玻片(15–25 μm,Sigma-Aldrich)上各非常干燥10微升该氢氧化钠盐硫酸铜溶液,接着随后渗入富含100毫摩尔巨峰葡萄糖注射液和0.3毫摩尔叠氮化钠的49:51重水:水氢氧化钠盐硫酸铜溶液中。为帮助囊泡生成,电*在10赫兹下增加1.1伏(均方根值)电阻值21天。以此得到 的囊泡在空调温度下存储在牛血清廉核蛋白包被的小瓶中。为才能减少较小囊泡的数,你们在施用前就直接用Whatmann 5.0毫米孔经的硝酸铵人造硅酸镁滤膜过滤清洁GUV氢氧化钠盐硫酸铜溶液(15)。在膜管化科学实验,施用感觉神经节苷脂GM1和染剂霍乱毒性488对外经济部膜叶确定复染,基本通过以下几点:将给出氯仿中的脂质搭配垃圾物传递到甲醇中,放入0.2质量%的GM1。然而按给出措施确定电收缩。在产品的样品备制前,向磷酸缓冲器食盐水(PBS)中放入50毫克/升的霍乱毒性488,仅对囊泡的外边叶确定复染。