Sulfo-CY3-MAL,磺化CY3-马来酰亚胺的使用方法
产品的称呼:Sulfo-CY3-MAL,磺化CY3-马来酰亚胺的动用工艺应用办法符号前筹备:目的大分子治理:核营养物质:为了确保指标核蛋白酶含解离巯基(如恢复型谷胱甘肽办理开裂二硫键)。多肽/核酸:就直接施用巯基表达的多肽或核酸(需手机验证表达转化率)。加载液选泽:安利减慢液:PBS(pH 7.4)、HEPES(pH 7.0)或Tris-HCl(pH 7.5),防范含替换剂(如DTT、β-巯基甲醇)的减慢液(会激烈生理反应)。放入剂:可放入EDTA(1-5 mM)螯合不锈钢正离子,下降被氧化副影响。标注反响:摩尔比:一般来说Sulfo-CY3-MAL与阶段目标分子结构的摩尔比值1:1-5:1(咖啡因中毒活性颜料可加强标注速率,但需之后纯化消除未想法活性颜料)。现象保障体系:将Sulfo-CY3-MAL充分均匀溶解于DMSO或DMF(终氧浓度≤10% v/v),迟滞假如含指标团伙的加载液中,轻抚混匀后环境温度孵育。不起作用中断:注入过量饮用巯基化学物质(如β-巯基乙酸乙酯至10 mM)淬灭未不起作用的马来酰亚胺基团,杜绝未果副不起作用。纯化与校验:纯化手段:透析:适宜于大氧大分子(如蛋白酶质)的纯化,快速清理未作用染剂和小氧大分子残渣。妇科凝胶过滤水:在使用Superdex 75或200柱分离法标记图片副产物与未不起作用活性染料。HPLC:反相HPLC(如C18柱)可快速转移标出多肽或小大分子。认可做法:荧光监测:在荧光分光光度计或凝胶的作用显像机系统安全验证符号物质的荧光发射卫星。SDS-PAGE:看齐记蛋清质开始电泳具体分析,探究荧光条带与蛋清条带是不是同步。质谱:经过MALDI-TOF或ESI-MS证实图标生成物的碳原子量变化。和睦提示卡:仅用做科学,不要用做我们身体实验英文!wyh