CY5标记的阿法替尼,Cy5-Afatinib的合成步骤概述
CY5标记符号的阿法替尼,Cy5-Afatinib的获得工作步骤简要
Cy5-Afatinib为在阿法替尼分子上接入近红区花菁染料Cy5的共价偶联物,目标是通过可控的间隔臂将染料与小分子骨架分离,以减小对母体分子结合域与电子结构的干扰,同时保持Cy5在640–650 nm吸收与660–670 nm发射的光谱特征。阿法替尼骨架含有活性烯酰胺(Michael受体)与芳胺/醚链取代位点,直接暴露于强碱或亲核硫/胺时易发生加成或副反应,因此标记策略以“先引入可控连接基 → 再与Cy5反应”为主。常见路径包括:在不触发烯酰胺的温和条件下,利用碳酸活化剂将分子上的可修饰羟基或二级胺转化为含伯胺或叠氮/炔基的功能化衍生物,再与Cy5-NHS、Cy5-N3/DBCO、或Cy5-alkyne进行后续偶联。为获得均一度与可表征性,一般优选单位点改造与亲水PEG间隔臂(PEG2–PEG6),以提升水溶性与色素-药物比例(D/P)控制度。
分解成步奏综述环节1:拼接臂对接。以阿法替尼可遮盖位点(比如侧链羟基或2级胺)为终点,在粗糙DMF内加入N,N’-二琥铂酰基碳酸酯(DSC)或对硝基苯基氯甲酸酯(pNPC)通过轻柔产甲烷(0–5 °C,TEA或DIPEA作缚酸剂),紧接着中滴加带伯胺的HO-(PEG)n-NH2或带叠氮/炔基的HO-(PEG)n-X,制成碳酸酯/氨基甲酸酯型阿法替尼-拼接臂两边体。调节等当量与時间,防止出现过度的产甲烷促使烯酰胺位点副体现。步驟2:与Cy5偶联。• 根目录A(胺-滋养酯):若间体末梢为伯胺,则在无水DMSO/DMF中与Cy5-NHS(或Cy5-SE三乙胺盐)表现,pH等效8.0–8.5(有机会相中以DIPEA剂量),室内温度背光0.5–2 h,转换安全稳定酰胺键。• 渠道B(怪物正交单击):若后面体带叠氮,则与Cy5-DBCO通过压力催进的SPAAC;若带炔基,则与Cy5-N3在CuAAC经济条件下作用(CuSO4/BTAA或THPTA配体,剂极富,水/设计融合液体)。工作步骤3:纯化与成盐。小团伙物品采取提取纯化型RP-HPLC(C18,水/乙腈+0.1%蒸发性酸)提取,收录主峰后冻干;必不可少时使用对亚铁离子相互交换以改进融掉性与动态平衡性。流程4:定量分析。UV-Vis/荧光判定光谱分析;HR-MS判定分子式量;1H/13C NMR效验联系臂与染剂的特点数据信号;HPLC溶解度≥95%。要留意:单趟闭光、低水活度操作步骤,逃避强核微生物培养基打交道烯酰胺;接臂大小与位点需实现小试优化网络,以稳定光学反应材质、融解性与的结构完全性。产品名称:CY5图标的阿法替尼,Cy5-Afatinib
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