CY7-lactoferrin，CY7标记图片乳铁球蛋白的聚合步数发展历程

CY7-lactoferrin 是将近红外花青染料CY7偶联到乳铁蛋白（Lactoferrin, ~80 kDa）表面的可反应侧链上所得的荧光蛋白探针。CY7具有740–760 nm吸收与770–790 nm发射的光谱窗口，能在复杂基质中获得低自发荧光背景与较深的穿透深度；乳铁蛋白则含有多处赖氨酸ε-氨基与少量半胱氨酸/二硫键位点，便于采用胺选择性或硫醇选择性策略实现标记。合理控制标记密度（degree of labeling, DOL）既可保持乳铁蛋白的构象与结合能力，又能获得稳定明亮的近红外信号，适用于载体构建、界面成像与微阵列固定化等研究场景。

结合步骤之一概况：①缓解液準備与去盐：将乳铁球球淀粉酶质（1–5 mg/mL）转移至0.1 M碳酸氢钠缓解液（pH 8.3）或无胺PBS（pH 7.4），在脱盐柱或30 kDa反渗透装置膜清理Tris、胺类比较可靠剂、叠氮钠与金属质螯合剂，不要限制化学活化酯不良反应迟钝。②化学活化酯胺化图标：取CY7-NHS酯（以无水DMSO专门配制1–10 mM产出液），在阴凉能力下按CY7：乳铁球球淀粉酶质摩尔比3–8:1极慢滴入至球球淀粉酶质氢氧化钠溶液（设计相占有率<10%），轻盈混匀，室内温度不良反应迟钝30–60 min。過量的DIPEA未必务必，基本上缓解液pH已有足够出具胺的亲核性。③淬灭与初始纯化：参加终酸度10–20 mM的甘氨酸或Tris淬灭多余NHS酯10 min；自后用Sephadex G-25抑菌凝胶过滤装置器或30 kDa反渗透装置膜（3–5次缓解转移）清理氧化钙含量染剂与小原子。④落实措施纯化（待选）：若要越来越高饱和度与单吸附化性，可所来进行SEC-HPLC（散发性盐缓解、等度或浅均值）分割有差异 DOL的混合物，收集整理主峰并当即缓解转移回存储保障体系。⑤DOL判断与服务质量控：信息A280与A750，采取CY7消光弹性系数与乳铁球球淀粉酶质本征释放（并做亮度学处理）测算DOL，个人目标必设在1–3 mol dye/mol protein；使用本征PAGE/SDS-PAGE下的近红外荧光激光散斑与考马斯复染照表，核实无显著的聚合或吸附；一定要时所来进行DLS评定水合比表面积与吸附化性。⑥代换位点定向委培机制（待选）：为从而提高位点采用性，先用Traut’s reagent（2-iminothiolane，pH 7.5，30 min）在赖氨酸上引出巯基，再与CY7-maleimide使用硫-马来酰亚胺增加（pH 6.8–7.2，30–60 min），自后按上面环节纯化与分析方法。⑦存储：制成品阴凉，4 °C一年期存储，长远可经无茵过滤装置器后参加10–20%甘油或者少量碳水化合物冷却养护剂，-20/-80 °C包装冻存，不要一直冻融。上面环节能力温暖、万能性强，方便于按的规模拖动并对DOL与构象比较可靠性改变精密自我调节。

产品名称：CY7-lactoferrin，CY7标记符号乳铁球蛋白

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