222164-96-7,AF 488 NHS活化酯的作用原理
较为常用名 TFAX 488,SE dilithium 英文版名 TFAX 488, SECAS号 222164-96-7 分子式量 659.453比热容 N/A 溶点 N/A原子式 C25H15N3O13S2Li2 融点 N/AMSDS N/A 闪点 N/A
一、化学结构与性质
AF 488 是 Alexa Fluor 系列的荧光染料,具有良好的光稳定性和高量子产率,激发峰约在 495 nm,发射峰约在 519 nm。其关键活性基团是 NHS 酯(N-hydroxysuccinimide ester),能够与分子中的游离氨基形成共价酰胺键,从而实现稳定的标记。这种化学性质保证了染料与目标分子之间的牢固结合,不易脱落。
二、作用原理
AF 488 NHS 的标记基于亲核取代反应。目标分子中的自由氨基攻击 NHS 酯基团,形成稳定的共价键,实现荧光染料与生物分子的永久连接。这种标记方式温和,不会显著改变蛋白质结构和功能,因此适用于体外分析和细胞成像实验。
三、应用领域
AF 488 NHS 广泛用于免疫荧光检测、流式细胞术、蛋白质追踪和分子相互作用研究。其绿色荧光信号亮度高,光漂白速度低,适合长时间观察。此外,它能够与其他荧光染料进行多色组合,实现复杂实验的多通道分析,为生物研究提供更多实验设计可能。
四、实验注意事项
在标记过程中,通常选择 pH 7–9 的无氨基缓冲液,以避免干扰 NHS 酯与目标分子的反应。标记后需通过透析或柱层析去除游离染料,以降低背景荧光。储存时应避光、低温保存,以保持染料活性和荧光强度。
五、总结
AF 488 NHS 活化酯是一种高效、稳定的绿色荧光染料,通过 NHS 酯基团与蛋白质或其他含氨基分子共价结合,实现生物分子的可视化。其亮度、稳定性和光学特性使其在细胞成像、免疫检测和蛋白研究中发挥了重要作用,是现代生物实验中不可或缺的工具之一。