CY3-Streptavidin,花菁染料CY3标记链霉亲和素的反应条件
CY3-Streptavidin,花菁染剂CY3标上链霉亲和素的化学反应的条件
Cy3-Streptavidin是将花菁染料Cy3共价偶联至链霉亲和素(Streptavidin, SA)形成的荧光标记蛋白,用于生物检测、分子示踪和免疫分析。链霉亲和素是一种由四聚体蛋白组成的细菌来源蛋白,具有高亲和力和特异性结合生物素(Biotin)的能力(结合常数Ka≈10¹³–10¹⁵ M⁻¹),应用于生物标记、免疫检测、蛋白固定化及纳米技术研究。Cy3是一种红橙色荧光染料,吸光约550 nm,发射波长约570 nm,具有高量子产率和良好光稳定性。通过Cy3标记,链霉亲和素在保持生物素结合活性的同时,可实现荧光示踪,用于多种生物实验和分子成像研究。
想法必备条件想法基本原理Cy3染色剂往往以亲水性酯形态(如NHS酯)保证,与链霉亲和素球蛋清酶的赖氨酸侧链氨基引发亲核改变体现,转变成比较稳定的酰胺键。该共价偶联全过程一种温和性的球蛋清酶质化学上突显体现,往往不易危害球蛋清酶的3级构成或海洋生物素配合亲水性。降低风险管理体系会选择响应需要在适当pH的减慢液中实施,以以确保蛋清结构类型平稳和氨基响应活性氧。惯用减慢工作体系为pH 7.4–8.5的磷酸减慢液(PBS)或碳酸盐减慢液(0.1 M NaHCO₃),pH过低会降氨基的亲核性,而pH过高已经影响蛋清构象不平稳或自聚在一起。减慢液中以免采用含胺类或硫醇类化学试剂(如Tris、DTT、β-巯基乙酸乙酯),以防止与NHS酯争夺响应。Cy3与链霉亲和素摩尔比偶联发应基本上应用Cy3与SA血清的摩尔参考值3:1至10:1,可要根据的需求标识孔隙率单位调节器。低摩尔比可以确保血清菌物生物体化,高摩尔比可从而提高荧光难度,但可能会反应血清折叠伞或菌物素可以通过力量。标识孔隙率单位基本上可以通过UV紫外线-因而光谱图校正Cy3吸光度与血清氧化还原电位参考值通过评价指标。环境温度与精力调节生理不起作用在温度(0–4℃)或空调温度经济条件下来,常见不断地1–4个小时。温度能控制确保核血清不稳性,降低聚积地或化学降解。别过长的生理不起作用准确时间机会促使非特女性朋友偶联或核血清部份转化。轻盈搅伴可担保生理不起作用透亮,减少局部位渗透压过高带来核血清聚积地。高沸点溶剂与染剂容解Cy3-NHS酯需降解于一些无机稀释剂(如DMSO或DMF)建成高质量浓度保障液,第二步较慢倒入水淀粉酶质饱和溶液中,尽量避免无机稀释剂比重过高(常见不超5%),谨防淀粉酶质性质发生变化。不良反应停止与纯化反馈完毕后,可采用填加甘氨酸或Tris缓解液撤销未反馈的特异性酯。马上又需删去游走Cy3纺织染料以取得澄澈的Cy3-Streptavidin,实用技术涵盖透析、凝胶的作用进行过滤色谱(如Sephadex G-25)或反渗透装置。纯化具体步骤中需实现温度低和缓解液不稳性,制止蛋白酶解离。产品平稳性与店铺纯化后的Cy3-Streptavidin可在PBS缓存液中相对稳定永久存放,并倒入氨值值防锈剂(如0.02% NaN₃)必免微动物检测技术水污染。背光存放于4℃短期的实用,-20℃要用于长时永久存放。荧光性和动物技术素结合在一起活性氧在适度标准下可长期保持大半年至半年。总结出Cy3-Streptavidin实现NHS酯风格的Cy3与链霉亲和素赖氨酸氨基共价偶联变成,发生响应必须pH 7.4–8.5缓解液中超高温轻混合开始,摩尔如果发生响应时段需优化系统以保护荧光构造和蛋清海洋菌物特异性。发生响应达成后实现透析或疑胶筛选清理存在有机染料,取得高纯净度Cy3-Streptavidin。该荧光标上蛋清相相结合了Cy3信息可视化实用功能与SA高判断力海洋菌物素相相结合功能,广泛应用于免疫力检侧、分子式示踪、荧光影像和海洋菌物用料标上等科学实验采集体系。产品名称:CY3-Streptavidin,花菁有机染料CY3标识链霉亲和素
含量:95%+遗传性状:固态物体或溶剂贮藏环境:-20°C空气干燥闭光存为包装袋标准:50mg 100mg 250mg 500mg(按需展示)批发厂家:pg电子娱乐游戏app 菌物


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