AF488 Phalloidin(鬼笔环肽-AF488标记)是一种荧光标记的鬼笔环肽(Phalloidin),通过与绿色荧光染料Alexa Fluor 488(AF488)偶联,广泛应用于细胞生物学、分子生物学等领域。鬼笔环肽是一种来自毒蘑菇的毒素,能够特异性结合并稳定细胞内的F-肌动蛋白(F-actin)。AF488 Phalloidin通过这种特异性结合能力,使得F-肌动蛋白能够在荧光显微镜下被直接标记和观察,从而帮助研究人员分析细胞骨架、细胞迁移、分裂以及其他与肌动蛋白相关的生物学过程。
二、其主要特点荧光特性:
AF488是一种绿色荧光染料,激发波长为495 nm,发射波长为519 nm,具有较高的亮度和较长的荧光寿命,能提供较高的信噪比。由于AF488的高亮度和稳定性,它成为细胞骨架研究和免疫荧光实验中常用的标记工具。
特异性结合F-肌动蛋白:
鬼笔环肽(Phalloidin)能够特异性地与F-肌动蛋白结合,稳定其结构,并防止F-肌动蛋白解聚。因此,AF488标记的鬼笔环肽能够精确地标记细胞内的F-肌动蛋白纤维,成为研究细胞骨架、细胞形态和动态变化的重要工具。
细胞兼容性:
AF488 Phalloidin对细胞的毒性较低,能够在不干扰细胞正常功能的情况下标记F-肌动蛋白。它适用于多种细胞类型,包括固定和活细胞,能够有效展示细胞骨架的组织结构和动态变化。
适用于多种实验平台:
AF488 Phalloidin广泛应用于荧光显微镜、共聚焦显微镜和流式细胞术等实验技术中。由于其强烈的荧光信号,研究人员可以轻松观察和定量分析细胞内F-肌动蛋白的分布、结构和变化。
储存条件:
AF488 Phalloidin应储存在-20°C的低温环境中,避免多次冻融。避免暴露在强光下,以防荧光信号的衰减。
荧光显微镜使用:
在使用荧光显微镜观察时,选择适合AF488激发和发射波长的滤光片组。AF488的激发波长为495 nm,发射波长为519 nm。
细胞固定与透化:
在细胞染色时,需要使用适当的固定剂(如甲醛)固定细胞,并且有时需要进行细胞膜透化,以便鬼笔环肽能够顺利进入细胞并与F-肌动蛋白结合。透化剂如Triton X-100或Saponin可用于提高染色效率。
染色浓度的优化:
AF488 Phalloidin的染色浓度需根据实验要求进行优化。过低的浓度可能导致信号较弱,过高的浓度可能导致非特异性结合。