概述
FAM-11-dUTP, 6-isomer是一种功能化核苷酸衍生物,由脱氧尿苷三磷酸(dUTP)与6-羧基荧光素(FAM, 6-isomer)共价连接而成。该化合物在DNA合成中可作为胸苷的类似物被DNA聚合酶掺入新合成DNA链,提供绿色荧光信号,便于DNA标记、可视化和定量分析。FAM的6-isomer结构赋予染料良好的光稳定性和亮度,适合在多种分子生物学实验中使用。
实验应用
FAM-11-dUTP广泛应用于DNA标记、荧光探针制备、实时PCR(qPCR)、原位杂交(FISH)以及细胞DNA复制研究。在DNA合成实验中,它可被掺入新合成的DNA分子,实现对DNA复制速率和分布的可视化。结合多通道荧光成像技术,可以与其他不同波长荧光标记联合使用,实现多重检测和高通量实验。
优势特点
FAM染料具有高亮度、光稳定性好、荧光效率高的特点。6-isomer结构增强了染料在水溶液中的溶解性,减少非特异性结合,提高信号可靠性。该化合物与多种DNA聚合酶兼容,可在体外或细胞实验中高效掺入DNA链,提供均匀、稳定的绿色荧光信号,适合对DNA复制和细胞周期进行精细分析。
实验注意事项
在实验中,应避免长时间光照以减少荧光漂白。掺入效率会受到DNA聚合酶种类、反应温度和时间的影响,因此需优化实验条件以获得最佳信号。在细胞或组织水平实验中,建议控制掺入时间及洗涤条件,以确保信号均匀且稳定。
研究价值
FAM-11-dUTP, 6-isomer可用于追踪新合成DNA、分析细胞分裂和DNA代谢动态,为基因功能研究、药物筛选及细胞周期分析提供可靠工具。其绿色荧光信号低背景、稳定性高,适合在多通道和多重标记实验中使用,为分子生物学研究提供直观的数据支持。
总结
总体来看,FAM-11-dUTP, 6-isomer是一种高亮度、光稳定性强、水溶性良好的功能化核苷衍生物。通过兼容DNA聚合酶的掺入方式,它可用于DNA标记、细胞追踪及探针制备,为基础研究和应用实验提供稳定可靠的实验工具。



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