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FITC-dextran,异硫氰酸荧光素标记葡聚糖/右旋糖酐的制备方法
发布时间:2025-10-09     作者:axc   分享到:
FITC-dextran,异硫氰酸荧光素图标葡聚糖/右旋糖酐的制得措施简称:

FITC-Dextran 是通过异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate, FITC)与葡聚糖(Dextran,又称右旋糖酐)偶联形成的荧光标记多糖。葡聚糖为由 α-D-葡萄糖残基通过α-(1→6)主链及少量α-(1→3)支链连接形成的水溶性多糖,分子量可根据实验需求选择从数千到几十万道尔顿不等。该多糖分子具有良好的水溶性、可调控分子量以及丰富的羟基官能团,可通过化学修饰引入氨基或其他反应位点,为FITC偶联提供基础。FITC-Dextran 兼具葡聚糖的高水溶性和FITC的荧光特性,广泛应用于细胞追踪、荧光标记、药物递送以及生物实验体系的分子动力学研究。

FITC-Dextran 的分离纯化技术例如例如一些流程:
  1. 氨基化葡聚糖的制备
    原始葡聚糖分子含有大量羟基,但与FITC偶联需要胺官能团参与。通常通过还原胺化方法将葡聚糖还原末端或部分侧链羟基转化为伯胺或仲胺。例如,利用氨水或乙二胺在温和条件下与葡聚糖进行反应,引入氨基功能,从而为FITC偶联提供亲核位点。氨基化程度可通过调节反应时间、温度及氨基试剂浓度控制,以保证偶联后荧光性能和多糖溶液稳定性。

  2. FITC偶联反应
    FITC 的异硫氰酸基(–N=C=S)可与胺化葡聚糖的氨基发生亲核加成,形成稳定的氨基异硫氰酸酯(thiourea)键。偶联反应一般在弱碱性缓冲液(如碳酸氢钠缓冲液,pH 8.0–9.0)中进行,室温条件下反应数小时至一夜即可完成。反应过程中,光照需避免直接照射以防FITC降解。FITC与葡聚糖的摩尔比可调控标记密度,高密度标记增强荧光信号,而低密度标记可减少聚集或分子间猝灭。

  3. 纯化与分离
    偶联反应完成后,需去除未反应的游离FITC及小分子副产物。纯化方法包括透析、凝胶过滤或超滤。透析一般采用适当分子量截断(MWCO)膜,将FITC-Dextran 保留在膜内,同时透析出游离FITC。凝胶过滤(如Sephadex G-25)可进一步分离标记产物,保证产物纯度和均一性。纯化后的FITC-Dextran 通常呈水溶液状态,便于后续实验应用。

  4. 浓度与标记度测定
    纯化后的FITC-Dextran 可通过紫外-可见光谱或荧光光谱测定荧光团浓度,并结合多糖浓度计算标记度(Degree of Substitution, DS)。标记度对荧光强度和溶液稳定性具有重要影响。根据实验需求,可选择低标记度(弱信号、减少干扰)或高标记度(增强荧光信号)。

  5. 储存与稳定性
    FITC-Dextran 水溶液一般储存于避光、低温条件(4℃或–20℃)下,可维持荧光性能和分子结构稳定性。固态粉末形式通过冻干处理可长期保存,使用前溶解于适当缓冲液。分子量大小及溶液浓度对黏度和扩散性能影响明显,高分子量版本适用于缓慢释放或体内示踪实验,而低分子量版本适用于快速分布或渗透性研究。

  6. 应用相关特性
    FITC-Dextran 通过荧光标记提供可视化功能,可用于细胞摄取实验、血管通透性检测及药物递送追踪。葡聚糖主链的化学稳定性和水溶性保证实验操作的可重复性和分子稳定性。分子量和标记度的调控使其在不同实验体系中具有适应性,既可作为荧光探针,也可与其他载体系统结合,扩展功能性应用。

产品名称:FITC-Dextran

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FITC-Dextran

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