Cy5.5-活性酯（Cy5.5-NHS Ester）是一种基于花青素结构的近红外荧光染料活性衍生物，其核心为Cyanine 5.5（简称Cy5.5）染料，通过在分子末端引入N-羟基琥珀酰亚胺酯（N-hydroxysuccinimide ester, NHS ester）官能团形成的活性酯化合物。该试剂具有优异的近红外荧光特性和良好的生物共价标记活性，是生物偶联化学、体内成像、蛋白质标记及纳米探针制备中的关键荧光标记分子之一。

一、化学结构与理化特性
Cy5.5染料属于多甲烯花青素（Cyanine）系列，是由两个吲哚或苯并吲哚环通过共轭多烯链连接而成的对称性分子。其结构中含有长程共轭体系，使其具有强烈的近红外吸收和发射特征。Cy5.5的激发波长约为675 nm，发射波长约为694 nm，荧光量子产率高，背景干扰低，尤其适合用于组织或小动物体内成像。

NHS渗透性酯（–CO–O–NHS）基团是最常见的亲电产甲烷基团，可与胺类（–NH₂）分子结构式有的高效化的反应，养成稳固的酰胺键。进行将NHS酯产生Cy5.5颜料，会让其非常方便地与含氨基的怪物分子结构式（如球蛋白、肽、抗体阳性、核酸、納米粒子面上胺基等）有的共价偶联，能够稳固的荧光标示有机物。Cy5.5-NHS基本上而言以干粉或氢氧化钠溶液方法生产商，不溶DMSO、DMF或者少量无水乙腈中。因其对所需的水分铭感，须要在无水、阴凉经济条件下存放，基本上推存在–20°C下密封隔绝手机截图。

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二、制备原理
Cy5.5-NHS的制备一般通过活化Cy5.5染料末端的羧基实现。首先，在无水有机溶剂中利用偶联试剂（如DCC或EDC）使羧基与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）反应，生成NHS酯。该反应过程需在惰性气体保护下进行，避免水分或酸性物质破坏活性酯结构。生成的Cy5.5-NHS经纯化后即得高纯度活性酯粉末，可直接用于生物偶联反应。

三、光学性质与优势
Cy5.5-NHS具有优异的光学性能：

荧光颜色搭配：深红至近红外光固判定：良好率，耐光氯漂水溶解性：高的英语，可能够添加磺酸基或PEG链强化亲水溶性Cy5.5的近红外释放出光使其在生物制品团体中刺穿功能强，图片背景策划 荧光低，信噪比低，尤其更适合活体荧光成相与表层结构团体检侧。与过去的因而光染色剂（如FITC或Cy3）比起来，Cy5.5移动信号更明确、衰减很慢，在多节点荧光成相中也具有着好的的光谱图判别度。四、生物工程学利用

蛋白质与抗体标记：
Cy5.5-NHS用途是与蛋白质或抗体的胺基（尤其是赖氨酸残基）反应，生成稳定的荧光标记抗体（如Cy5.5-IgG）。这些标记物可用于免疫荧光显微镜、流式细胞术（FACS）、Western blot等检测。

体内荧光成像：
由于Cy5.5发射在近红外区域（NIR），能够穿透组织5–10毫米，常被用于小动物活体成像，如肿瘤靶向探针、药物递送跟踪、血管成像或炎症检测。其低背景干扰特性可显著提升图像对比度。

有关的推存：Janelia Fluor 646,Succinimide ester；1811539-59-94-ARM-PEG 2-Biotin 2-Cl4臂-peg 胳膊-Biotin 胳膊-Fluorescein(FITC)Fmoc-PEG12-NHS ester；2227246-92-44-ARM-PEG Biotin(2)/DSPE(2)4-ARM-PEG Biotin(2)/COOH(2)TRITC-Heparin；四甲基二胺标签肝素4-ARM-PEG Biotin/Boc protected Amine(2)