DiR-叠氮，DiR-Azide，DiR-N3的合成及纯化过程

DiR-叠氮（DiR-Azide, DiR-N₃）是一种基于近红外荧光染料 DiR 的功能性探针，通过将 DiR 染料的末端官能团与叠氮（Azide, N₃）衍生物偶联形成。DiR 为远红光区荧光染料，其激发波长约 748 nm，发射波长约 780–790 nm，具有低背景干扰和深组织穿透优势。叠氮官能团可与炔基（-C≡C-）通过点击化学（Cu(I)-催化的叠氮-炔烃环加成反应，CuAAC）高效、特异性偶联，成为构建荧光标记分子、生物分子修饰及药物载体功能化的重要工具。DiR-N₃ 可用于蛋白质、核酸、小分子化合物的荧光标记及分子示踪研究。

耐腐蚀上，DiR-N₃ 氧原子核由两个最主要的那部分分为：DiR 荧光活力染料重要区、相连桥及未端叠氮官能团。DiR 重要区由长链共轭采集体系中定义，以确保远红光区荧光耐热性及脂可溶。相连桥完成羧基碱化或碳链相连，将叠氮加入 DiR 氧原子核未端，也始终维持 DiR 电子光学耐热性和叠氮的耐腐蚀活力。未端叠氮官能团在点击事件耐腐蚀中看做亲电学校，可与炔基怏速建成安全的 1,2,3-三唑环，达到实时控制共价偶联。该氧原子核在有机物高沸点溶剂及抗震采集体系中下类可安全操作的。合成视频过程中现状分析主耍包涵接下来步骤之一：

1. DiR 荧光染剂末段滋养：DiR 原子核末段经常含羧基或羟基，可确认 NHS 酯化、碳酸二亚硫酯或别羧基滋养技术生洞房花烛电正原料药（DiR-NHS 或 DiR-滋养羧基），提升与叠氮官能团偶联的能力。滋养化学反应一般来说在无水或低水生产石油醚（如 DMF、DMSO）中来进行，为了防止止水解反应。
2. 叠氮繁衍物制得与偶联：叠氮繁衍物大部分为含游离态胺或羟基的 N₃-单质。经过与碱化的 DiR-NHS 或 DiR-碱化羧基体现，制成稳定可靠的酰胺或酯相连接键，将叠氮官能团转化 DiR 原子核未端。偶联的过程 中长期保持温暖的条件（高温至严重供暖，pH 7–8）以保护好 DiR 光电器件的性能和叠氮官能团的活性酶类。
3. 相无线连接桥seo：为维持 DiR 管理处和叠氮末的发展空間单独的性，并缩短发展空間拘束（steric hindrance），可在偶联的过程 中获取短链或聚乙二醇类相无线连接桥，导致后面续弹窗催化或生物工程偶联中做到优质作用性。
4. 终货物纯化：偶联完全后，可以通过蛙胶柱层析、反相 HPLC 或透析洗去未发生不良反应的 DiR、叠氮底物及副终货物。纯化阶段确定 DiR-N₃ 的高纯净度、荧光不准确稳定性处理性和偶联特喜欢的人，为后期的弹框发生不良反应或生物制品标记符号实践给出准确地基。
5. 副产物定量分析：依据质谱（MS）填写分子结构量与预想相符；核磁震荡（NMR）印证拼接桥和酰胺键构成；红外光谱图分析（IR）检侧叠氮结构特征峰（~2100 cm⁻¹）和羰基官能团。UV-Vis 光谱图分析可填写 DiR 近红外荧光性能参数保持良好。

DiR-叠氮的镶嵌工作体现出了纯化抉择性、亲核偶联各种和气标准调节的的基本原则。在科学构思衔接桥、调节偶联标准及提高效率纯化，可换取节构维持、技能完美的 DiR-N₃。该团伙能以为近红外荧光测试探针，中用蛋白质、肽链、小团伙类化合物的标志，在点选耐腐蚀满足高非特异朋友共价偶联，在生物体成相、口服药递送及团伙示踪研究方案中发挥反应至关重要反应。上述讲到上述情况，DiR-叠氮就是种节构不稳定性、实用能力结合的近红外荧光检测器，其合成图片凭借 DiR 碱化、叠氮偶联、相连桥SEO、乙酰乙酸纯化及深入分析方法控制碳原子实用能力化，为碳原子标记图片和怪物三维显像深入分析出具高效、性价比最高准确道具。凭借该策略性，可在深安排三维显像和怪物标准体系中控制高机灵、低底色的荧光探测应用软件。

产品名称：DiR-Azide,

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