AF514 NHS Ester，AF 514琥珀酰亚胺酯，纯化与处理
AF514 NHS Ester（又称AF 514琥珀酰亚胺酯）是一种功能性荧光标记试剂，由Alexa Fluor 514荧光团与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活性酯结合而成。Alexa Fluor 514属于绿色荧光染料，激发峰约为514纳米，发射峰约为540纳米，具有高量子产率、亮度高、光稳定性良好的特点。该染料可用于蛋白质、多肽、抗体及其他含伯胺官能团的生物大分子的荧光标记。NHS酯末端为分子提供高选择性的化学活性，使其在温和条件下可与伯胺发生共价偶联反应，生成稳定的酰胺键。
AF514 NHS Ester原子型式是指二部分：荧光管理处、羧基纯化位点并且 已经的亲水性聚氨酯所代替基。荧光管理处从而提高清亮的绿色健康数字信号，容易多通畅三维成像实验所；NHS酯最为化学活化位点，保障高会暂时性和极有转化率率的共价连结；亲水所代替基从而提高水可溶，少非特女性朋友吸附物，使其在抗震液和海洋生物保障体系中使用的更有稳固。发应状态缓冲液体系
AF514 NHS Ester的反应通常在中性或弱碱性缓冲液中进行，pH范围一般为7.0至8.5。此条件下，伯胺具有足够的亲核性，可以攻击NHS酯形成酰胺键，同时NHS酯在该pH范围内保持稳定，不易水解。常用缓冲液包括磷酸盐缓冲液（PBS）、碳酸盐缓冲液或HEPES缓冲液。避免使用强酸或强碱环境，因为会导致NHS酯水解或荧光团降解。溶剂选择
反应可在水相体系或含少量极性有机溶剂（如DMSO、DMF）体系中进行，以溶解NHS酯或调节反应底物的溶解性。对于水溶性蛋白或生物分子，通常直接在缓冲液中溶解并反应；对于疏水底物或需要提高溶解性的情况，可加入少量DMSO或乙醇，但一般不超过10%体积，以避免蛋白质变性或荧光猝灭。温度控制
反应温度通常在室温或低温（4至25摄氏度）进行。温和温度可确保蛋白质或生物分子的活性不受破坏，同时降低荧光团光漂白的风险。部分对温度敏感的生物分子可选择4摄氏度下反应，延长反应时间以确保偶联效率。反应时间
NHS酯与伯胺的反应速率较快，一般在室温下反应1至2小时即可完成。对于低浓度蛋白质或较复杂体系，可适当延长反应时间至数小时，以提高标记效率。反应过程中应避光操作，以保护荧光团。摩尔比控制
反应摩尔比的选择直接影响标记密度和生物分子功能保持。一般情况下，NHS酯略过量使用于蛋白质或抗体，以确保反应充分；对于敏感蛋白质，可控制摩尔比接近1:1，以避免多点偶联导致结构或功能损失。纯化与储存
反应完成后，通常需要去除未反应的NHS酯和副产物，可通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）纯化。纯化后的标记产物应在避光、低温条件下储存，以维持荧光性能和化学稳定性。储存缓冲液中可添加少量抗氧化剂或低浓度盐以增强稳定性。
产品名称：AF514 NHS Ester，AF 514琥珀酰亚胺酯
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