AT 425 Maleimide，CAS号：892156-52-4，纯化与表现

AT 425 Maleimide（CAS号892156-52-4）是一种功能性荧光标记试剂，属于马来酰亚胺衍生物。AT 425荧光团的激发峰约为425纳米，发射峰约为450纳米，呈蓝色荧光，具有较高量子产率和良好的光稳定性。马来酰亚胺官能团能够与硫醇（–SH）基团特异性反应，形成稳定的硫醚键。这种高选择性的共价结合特性使AT 425 Maleimide在蛋白质、多肽及其他含巯基分子的标记、偶联以及荧光探针构建中具有重要应用价值。该分子设计兼顾光学性能、反应特异性及化学稳定性，为化学和生物研究提供了可靠的荧光标记工具。

纯化与分析方法

1. 纯化方法
   AT 425 Maleimide在合成过程中可能伴随残留的未反应荧光团、杂质或副产物，需要进行纯化以保证产品的高纯度和标记效果。常用的纯化方法包括：

• 高效液相色谱（HPLC）纯化
  HPLC是AT 425 Maleimide纯化的主要方法。通常选择反相C18柱，通过梯度洗脱（如水/乙腈或水/甲醇体系）实现目标产物与副产物的分离。流动相中可加入微量三氟乙酸（TFA）或乙酸调节pH，提高分离效率和峰形对称性。通过监测紫外吸收（约425纳米）和荧光信号，可有效识别和收集纯化产物。

• 硅胶柱层析
  在规模较小或实验室合成中，可采用硅胶柱层析进行初步分离。选用适当极性的溶剂体系（如乙酸乙酯/己烷或氯仿/甲醇混合体系）进行梯度洗脱，将AT 425 Maleimide从反应副产物中分离。

• 重结晶
  对于高纯度固体产品，可通过溶剂重结晶进行精制。选用溶解度差异明显的有机溶剂体系（如乙醇/水、乙酸乙酯/己烷）进行反复结晶，可获得结晶纯品，提高化学纯度和光学性能。

1. 表征方法
   AT 425 Maleimide的表征主要通过化学和光学手段，确认结构完整性和纯度：

• 核磁共振（NMR）谱
  ¹H NMR和¹³C NMR可用于确认荧光核心和马来酰亚胺官能团的化学环境。通过化学位移、耦合常数及积分面积可验证分子结构是否正确，是否存在残留副产物。

• 质谱（MS）
  质谱分析可用于确定分子量及分子式，确认目标产物的存在。高分辨质谱（HRMS）能够区分分子与同分异构体或杂质，确保分子结构的准确性。

• 紫外-可见吸收光谱（UV-Vis）
  AT 425 Maleimide具有特定的吸收峰（约425纳米），通过测定吸收光谱可判断产物浓度及纯度。同时，吸收谱可用于评估荧光团在反应或储存过程中是否降解。

• 荧光光谱
  测定激发和发射光谱（激发约425纳米，发射约450纳米）可验证荧光性能，判断荧光团是否保持完整。荧光强度和光稳定性也是纯化产物质量评价的重要指标。

• 薄层色谱（TLC）
  在实验室快速检测中，可采用TLC进行粗略纯度分析。通过对比Rf值及荧光观察，可初步判断反应是否完成及杂质存在。

1. 纯化与表征的意义
   纯化保证了AT 425 Maleimide的高化学纯度和高荧光活性，从而提高与生物分子偶联的效率和特异性。表征则确保结构正确、荧光性能稳定，为后续蛋白质标记、抗体偶联及分子探针构建提供可靠依据。高纯度的AT 425 Maleimide可在体外和体内实验中实现准确的荧光信号，降低非特异性结合和背景干扰。

产品名称：AT 425 Maleimide

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