AF647-Glucose oxidase，AF647标记葡萄糖氧化酶的体现机制

AF647-Glucose oxidase是一种荧光标记的酶分子，由水溶性荧光染料Alexa Fluor 647（AF647）与葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase, GOx）通过共价偶联形成。AF647具有吸收峰约650 nm、发射峰约668 nm的特性，荧光信号强、稳定且水溶性良好。通过将AF647标记在GOx分子上，可实现酶的可视化追踪，用于体外实验、载体研究和酶活性分析等。AF647-Glucose oxidase的反应步骤设计在保持酶活性和荧光性能的前提下完成，以确保标记分子既可检测又可功能化。

体现原里草莓糖氧化物酶有的是种具有刺激性蛋白酶质残基的蛋白酶质原子核，原子核链上具有刺激性丰富的的氨基（一般是赖氨酸残基）和羟基官能团，是AF647偶联的一般表现位点。AF647大部分以NHS酯亲水性样式会出现，就可以与GOx的自由氨基导致稳固的酰胺键，实现目标共价一定。该表现在柔和前提下做，逃避毁损酶的三阶段设备构造和崔化亲水性。响应步奏

1. 酶溶液准备
   将GOx溶解于适宜的缓冲液中（通常使用pH 7.0–7.5的PBS或碳酸盐缓冲液），保证酶溶液均匀且无沉淀。缓冲液选择需兼顾酶活性和NHS酯反应效率，避免含有会与NHS酯反应的自由胺（如Tris）。

2. 荧光染料溶解
   AF647-NHS酯通常溶解于干燥的有机溶剂（如DMSO或DMF）中，制备高浓度储备液。溶解后应避免长时间光照，以防荧光团光漂白。

3. 混合反应体系
   将荧光染料储备液按设定摩尔比缓慢加入GOx溶液中。摩尔比通常控制在1:1至5:1之间，以调节标记密度，同时避免过度标记影响酶活性。混合后轻轻搅拌，使染料均匀分布并充分接触酶分子。

4. 偶联反应进行
   反应体系在室温或轻微低温条件下进行，反应时间一般为1–2小时。NHS酯与赖氨酸残基的氨基发生亲核加成，形成稳定的酰胺键。反应过程中保持pH在7.0–7.5范围，保证酶结构稳定及NHS酯反应活性。

5. 反应终止与缓冲交换
   反应结束后，通过加入甘氨酸或Tris缓冲液可终止NHS酯反应，清除未反应的活性酯。此步骤可防止多余染料对酶活性产生干扰。

6. 纯化
   偶联产物中含有未反应的染料和副产物，需要通过透析、凝胶过滤或分子筛柱进行纯化。纯化后的AF647-GOx溶液去除小分子杂质，保留标记酶分子及荧光性能。

7. 表征与活性验证
   纯化后的产物可通过紫外-可见光吸收光谱和荧光光谱确认荧光标记成功。同时，通过酶活性测定（如比色法检测H₂O₂生成）验证标记后GOx仍保持催化功能，确保实验可用性。

产品名称：AF647-Glucose oxidase

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