Streptavidin,Cy3 conjugate， 链霉亲和素-Cy3偶联物的制备方法

链霉亲和素-Cy3偶联物（Streptavidin, Cy3 Conjugate）是一种由链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料Cy3通过化学方法偶联形成的复合物。Cy3是一种广泛用于生物学研究的有机荧光染料，具有橙红色的发射光谱。链霉亲和素是与生物素结合能力极强的蛋白质，广泛应用于生物标记、免疫检测和分子探针研究。通过将Cy3与链霉亲和素结合，产生的复合物具有高特异性、灵敏度以及可视化功能，广泛应用于荧光成像、免疫分析、分子探针等领域。

提纯手段有机化学合成链霉亲和素-Cy3偶联物的基本的方法步奏包扩链霉亲和素与Cy3有机染料的有机化学偶联生理反应。以下的就是好似有机化学合成步奏，具体情况环境和方法步奏可能会选择科学实验各种需求和所施用的实验试剂有所作为有差异 。1. 产品做好准备

• 链霉亲和素（Streptavidin）：使用商业地产化的链霉亲和素，常开始Streptomyces avidinii中制备的四聚体淀粉酶。应使用未经历过很多装饰的链霉亲和素，以保证 其与微生物素的结合在一起效果中受后果。
• Cy3荧光有机活性染料：Cy3（或Cy3.5）是一个种经常使用的荧光有机活性染料，含有增强光主光波波长约为550 nm，试射主光波波长约为570 nm。Cy3往往以NHS（N-Hydroxysuccinimide）酯类型供给，方便快捷与链霉亲和素上的氨基想法。
• 减慢液：PBS减慢液（磷酸二氢钠减慢食盐水）主要用于稀释溶液链霉亲和素及Cy3颜料。一般 选用pH参考值7.4的PBS。
• 2. Cy3颜料碱化

Cy3染色剂以NHS酯（N-Hydroxysuccinimide ester）内容有，这类酯化内容能与链霉亲和素表面层曝露的氨基（-NH2）出现亲核响应，变成共价偶联。率先，要将Cy3染色剂在应当的相转移催化剂（如DMSO或水）中容解并希释至所需要的溶度。安全使用PBS储存液将Cy3染色剂采取滋养，普通在0-4°C下采取响应，以解决过快的响应传输速度。3. 链霉亲和素的预外理在偶联反响前，链霉亲和素想要由非常合适的预加工处理。基本安全使用PBS或其余非常合适的保护器液（如HEPES保护器液）对链霉亲和素通过掺水，以确定其在反响期间中的安全性和活性酶。如若链霉亲和素中具有沉渣或未已经可无水磷酸氢高，溶于水的的淀粉酶，会通过透析或离心式过滤器弄掉不无水磷酸氢成分。4. 链霉亲和素与Cy3偶联发生反应将Cy3颜料的NHS酯加盟到链霉亲和素盐溶液中，遵循必要的摩尔比实行反响。一般来说，Cy3颜料与链霉亲和素的摩尔比值1:1或基于研究要采取调节。反响一般来说在4°C下实行，且反响日期也可以安装为1-2每小时，以确保安全更加充分偶联。反响流程中，Cy3的NHS酯要素会与链霉亲和素从表面氨基（如赖氨酸残基上的氨基）再次发生反响，确立安全稳定的共价结合起来。5. 取除未反应迟钝的Cy3颜料发生体现进行后，的安全用透析或抑菌妇科凝胶的作用滤出的做法除去未发生体现的Cy3有机颜料和一些小团伙沉淀物。透析的安全用适宜强弱的膜（如团伙量裁割为10-30 kDa的透析膜），常透析期间会坚持几小，到氢氧化钠溶液中不再出未融入的Cy3有机颜料。一旦的安全用抑菌妇科凝胶的作用滤出柱，可不可以的安全用普通的抑菌妇科凝胶的作用滤出材质（如Sephadex G-25），能够 过柱来除去不所需的团伙。6. 要确认偶联物的纯净度与错误率按照紫外光-常见光谱探讨探讨（UV-Vis）或荧光光谱探讨探讨法证明链霉亲和素-Cy3偶联物的盐浓度和饱和度。Cy3的吸附峰为宜在550 nm处，放出峰则有在570 nm左右。能否按照在线测量偶联产品的吸光度和荧光比强度来监测偶联热效率。要是运用SDS-PAGE疑胶探讨，也能否监测链霉亲和素的团伙量变化，证明偶联反响是否能够取得成功。

产品名称：链霉亲和素-Cy3偶联物

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