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Streptavidin,Alexa Fluor 546 conjugate的合成策略
发布时间:2025-12-24     作者:wyh   分享到:
食产品名字大全:Streptavidin,Alexa Fluor 546 conjugate的聚合营销策略一、重要组成部分与电化学组成部分链霉亲和素(Streptavidin):來原于链梅菌(Streptomyces avidinii)的四聚体核蛋白,大分子量约53-60 kDa,由七个完全相同亚基组成了,每一家亚基含159个碳水化合物,确立β-桶状结构类型。不同亚基可特男人通过一名动物制品素分子式式,四聚体共可通过3个动物制品素分子式式,进行高不稳定可靠性处理性挽回物(解离常数Kd≈10⁻¹⁴ M)。Alexa Fluor 546 荧光活性染料:橙大红色荧光染剂,刺激激发光谱556 nm,发射卫星激发光谱573 nm,荧光量子劳动生产率高,光增强性强,pH不太敏感(pH 4-10依据内荧光硬度增强)。普通机械性:应属磺化罗丹明延伸物,完成NHS酯与链霉亲和素的氨基(如赖氨酸残基)共价偶联,组成相对稳定的酰胺键。偶连结构:利用化学物质热塑剂(如NHS酯)将Alexa Fluor 546共价联接到链霉亲和素表面能氨基上,进行Streptavidin-Alexa Fluor 546 Conjugate,具有高感染力与荧光电磁波扩大性能。二、聚合线路与首要管控参数指标生成攻略 :NHS酯偶联法:Alexa Fluor 546的NHS酯与链霉亲和素的氨基在偏碱性水平(pH 6.5-7.5)下生理症状,型成酰胺键。生理症状温湿度25-37℃,时间间隔4-24h,需闭光制止荧光淬灭。纯化流程:透析(挪作他用分子式量3.5-10 kDa)、C18反相HPLC等度过柱或尽寸排阻色谱(SEC)快速清理未影响颜料和硫氰酸盐,色度≥95%。要点把握运作:pH改善:滋养步骤(如EDC/NHS滋养)pH 4.5-6.0,偶联步骤pH 6.5-7.5,动平衡羧基滋养与氨基活力性。摩尔比SEO:染剂与蛋白酶摩尔比1:1至10:1,以保证偶联质量还保存微生物素通过业务能力。石油醚组织体制:水相(PBS、生理变化茶水)或正负极有机质石油醚(DMSO、DMF),无水状况中用EDC/NHS纯化。

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