绿色荧光素标记牛血清白蛋白BSA-FITC合成详细步骤
红色荧光标示符号牛血纯洁球蛋白质的手段也可以考生荧光标示符号表面抗原的手段,因表面抗原也是一种种球蛋白质,明确手段一下:
预备素材:
1、异硫氰酸荧光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)异构体I(IsomerI),M.W:389.4射光谱图图(吸收能力光谱图图)493nm,荧光光谱仪550nm
2、牛血纯洁淀粉酶(BSA),M.W:68000,含量98%。(AlbuminBovineSerum)
3、标注保护液:0.5MpH9.5C.B,洗刷液:0.01MpH7.2PBS
记号步奏:
1:将待化学热塑的蛋清(氧化还原电位³1mg/ml)对化学热塑不良表现液透析四次4 ℃,至pH=9.0。化学热塑不良表现液调配技巧:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加盐定容至1 L。
2:将FITC混溶DMSO中,盐浓度为1mg/ml。每晚化学交联运用的FITC均应新鲜毛肚专门配制,阴凉。
3:按P:F(核核苷酸:FITC)=1mg:150μg 的比率将FITC变缓建立于抗原硫酸铜溶液中,边加边猛地摇动使其与抗原融合更加均匀,暗处4 ℃反應8 hr。
4:成为5mol/L的NH4Cl至终酸度50mmol/L, 4 ℃暂停响应2 hr。
5:将热塑物在PBS中透析4次超过,至透析液清亮。
6:化学交联物的评定F/P的比例: ,该值应大于等于2.5 ~ 6.5之前。
7:FITC交连的血清应放置pH7.4的磷酸缓解液中,加盟0.1% NaN3、1% BSA,4℃暗处保持。