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抗体的荧光标记之异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体的方法介绍
发布时间:2020-09-16     作者:zhn   分享到:
之类是抗原荧光标记图片?

将特喜欢的人抵抗能力阳性与荧光色素沉积完成化学式工艺配合上去,需先拥有荧光抵抗能力阳性。这一种荧光抵抗能力阳性与对应的抗原配合,构成荧光记号抵抗能力阳性-抗原复合型物,再完成独特的机器设备测量工具荧光,然而战胜原抵抗能力阳性采取示踪测量工具。当前,荧光抵抗能力阳性因高快速度、高特喜欢的人、易操作使用性被广泛的使用免疫加测印迹癌细胞仪、酶联免疫加测吸附剂、蛋白质红色印记、原位混种、荧光显像等测量工具中。

荧光素:能形成显然荧光并能当做染剂利用的有机肥料有机物通称荧光素或荧光染剂。适用性于标识球蛋白的荧光色素沉淀最主要有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC),四乙基罗达明(rho-damine B200,RB200)和四甲基异硫氰基罗达明(tetramethyl rhodamine isotheynate,TMRITC)。其实上当前应该用比多的只要 异硫氰酸荧光素一类。

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以下大家就以异硫氰酸荧光素(FITC)举例,简略解绍一些免疫抗体的荧光素标注的方法。

1.基本原理

诸多核苷酸质外壁有较多的赖氨酸残基,某些赖氨酸残基的散布ε-氨基可与FITC共价紧密联系。与FITC紧密联系的表面抗原可以使用为特喜欢的人的电极,以法测神经元相应的抗原的存在着。FITC包括很高的量子收获量(释放出光与汲取光的比率为0 .85),所以建立的偶联物的维持性挺好,FITC是迄今为止适用特别广的荧光颜料。在pH 9.8必要条件下,赖氨酸残基的游离于ε-氨基与FITC突发的亲核想法,就此产生硫脲接连。


2.标记方法

异硫氰酸荧光素常用的标记图片法有左右两者:

1)搅拌设备法(合适大原辅料)

  • 取某种量的纯化后的IgG稀硫酸,用0.5 mol/L pH9.8碳酸盐保护液掺水至20 mg/mL。

  • 按荧光素与表面抗原比1︰20~1︰100(通常情况用1︰100)称取异硫氰酸荧光素,用pH9.8碳酸盐降低液融化。

  • 将IgG盐硫酸铜溶液处于涡流攪拌器上,开机启闭,缓缓攪拌,以不会起沫是以。逐中滴加入荧光素液(约10min~15min加完)。实验设计过程中中,中途检验攪拌液的pH值,若不超过9.0,则应以碳酸钠盐硫酸铜溶液懂得调整。置4 ℃攪拌6 h~12 h时需。

2)透析法(满足试用装品)

  • IgG硫酸铜溶液用0.5 mol/L pH9.8碳酸盐抗震液就稀释成1%氧化还原电位,存放在透析袋中。

  • 将荧光素配制0.1 mg/mL,其量为1%免疫抗体盐溶液的10倍,装到烧杯内。

  • 将透析袋放置于烧小杯,释放磁均匀搅拌装置器上4 ℃均匀搅拌装置24可以了。

透析法的优势之处是标签均匀分布,非特异形荧光少,但所标签的日期长,荧光素的剂量多,约比搅拌装置法多10倍。


山东pg电子娱乐游戏app 生物体展示 异硫氰酸荧光素(FITC)标识免疫抗体Anti-FITC Antibodies

  • 荧光标示单克隆抵抗能力

  • 荧光标注多克隆抵抗能力

  • 荧光标记图片重新组合表面抗原

  • 荧光记号搭配抗体阳性

  • 荧光标上非结合起来免疫抗体

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