一、介绍 NHS 产甲烷的琼脂糖磁珠（Magarose-NHS）将核氨基酸简简单单**地共价确定到磁珠平台上，为抗体阳性、抗原或其余生态学团伙的亲和纯化能提供了有市场价值的具体方法。产甲烷的琼脂糖磁珠有也能与核氨基酸或其余团伙上的伯胺症状组成安全稳定的酰胺键的 N-羟基琥铂酰亚胺（NHS）官能团。藕合电路症状在 pH 7~9 的无胺响应液中实施。不怕配体的团伙量或等电点（PI）藕合电路症状的有效率均达到 80%。已经配体被确定，所配制的琼脂糖磁珠就可以以被使用到多个亲和纯化子程序中。  二、服务基本特征

產商品编码称	Magarose-NHS
2英文命名	PNHS纯化的琼脂糖磁珠
磁珠有机废气浓度	25% (v/v)  in ** 异丙醇
配基高密度	~ 50 μmol NHS/ ml磁珠
物质	6%化学交联磁块琼脂糖
粒度分布	20-45μm
配体根据	>20 mg IgG/ml磁珠
保持	2~8℃存储半年

注：磁珠蛋清根据量与指标蛋清特征参数关于，彼处仅作考虑值。   三、动用策略

1. 缓冲液

全部的水和缓冲液均用 0.22 μm 或 0.45 μm 的滤膜开展过虑。 ① Washing Buffer A: 1 mM 硝酸，利用前待冷却到 4ºC; ② Coupling Buffer A: 100 mM 2-吗啉乙磺酸 MES，pH 4.8（应用于等电点大于 7 的菌物分子式的偶联）;

③ Coupling Buffer B: 200 mM NaHCO₃， pH 8.3（用于等电点大于 7 的生物分子的偶联）;

④ Blocking Buffer: 3 M 工业乙醇胺，pH 9.0; ⑤ Storage Buffer: 含的质量成绩排名为 0.05%叠氮化钠的 PBS 保护液还是利用买家我需要主要采用各种保护液。

 

2. 流程关键点

1)        里面磁珠洗條要严要求按产品说明书书用保压的 Washing Buffer A（①）快洗條 ，提防磁珠在洗條进程中 NHS 基团淀粉水解；

2)        蛋白偶联过程中，**要通过实验确定合适的 Coupling Buffer（主要包括 Coupling Buffer A（②）、Coupling Buffer B（③）、50 mM 硼酸溶液pH 8.5、100mM磷酸缓冲液，100mM NaCl，pH7.4这四种）；

3)        明确刚好为宜的Coupling Buffer后，再由此Coupling Buffer 为基础上，明确刚好为宜的偶联球球球核蛋白酶质含量值，鉴于球球球核蛋白酶质含量值越高，偶联到磁珠上的球球球核蛋白酶质的量会越大（那是了解到 NHS 基团跟球球球核蛋白酶质偶联和 NHS 基团本身就油脂水解是对竞争力不良反应）。然而在此要综合评估了解动用机械性能和资金，有一点老客户偶联极富的球球球核蛋白酶质便可拥有动用业务需求，这是用低含量值的球球球核蛋白酶质便可，那样能够降低了资金。 4)        全封密性这1步需要利用3 M 乙酸乙酯胺，也可能用 Tris 抗震液（100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0），全封密性的时间应当超过 2 h，若是 化学上的全封密性胸口景从未很高，还需要三倍加1步 BSA 全封密性。  

3. 蛋白偶联操作步骤

以內工作过程中 以取磁珠备样 400 μL，所采用 1.5 mL EP 管特征分析讲解。访客可据自我标准按比倒进行调节。

蛋白溶液配制：取适量待偶联蛋白用 Coupling Buffer 溶解，配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液。已经保存于 buffer中的蛋白，需要通过透析或者脱盐的方法彻底除去原有 buffer 里含伯胺基的物质，然后再用 Coupling Buffer 配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液，将配制好的蛋白溶液于4℃保存备用。

注： (1)为达成较好的的性能，球蛋清盐浓度≥3.0 mg/mL，这样的话偶联效果会高，彼处需终合综合考虑价格和选择条件； (2)球蛋清液体中不允许所含带伯氨基的组成，假如 Tris，甘氨酸，明胶，BSA 等；   1)        取 400 μL 25%磁珠漂浮液于 1.5 mL EP 管上。磁隔离，清理上清液。 注：磁珠送样之前应该要总是倒转、实用涡旋式自由振荡器使其混合物光滑，以保护进行实验的一个性，每取一天样可以全新混匀。 2)        加 1 mL 2~8℃的 Washing Buffer A（①）于离心力分液漏斗，涡流 15 s，使磁珠交织竖直。将 EP 管放至磁块隔离架内，聚集磁珠，出掉上清液。 3)        加 200 μL 蛋白质饱和溶液于 EP 管上，涡旋压缩机 30 s，使其混合型粗糙。 注：磁珠洗衣机清洗后要随时进入血清溶剂。 4)        将 EP 管涡流压缩机压缩机 15 s，放置向下结合仪上，常温结合 2~4 h。比如向下结合不透亮，则化学反应前 30 min，每过5 min 拆出来 EP 管涡流压缩机压缩机 15 s。从始，每过 15 min，拆出来 EP 管涡流压缩机压缩机 15 s。 注：如遇需用都可以在 4ºC 现象隔夜。 5)        按照带磁分離架含有磁珠，永久保存上清。加 1 mL Blocking Buffer（④）于 EP 管内，涡流 30 s，将 EP 管移至带磁分離架内，含有磁珠，弃上清液。 注：Blocking Buffer（④）除去微生物培养基盒中供给的 3 M 酒精胺外，也就能够操作 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0 等其他一些封端微生物培养基。 6)        加 1 mL Blocking Buffer（④）于 EP 管上，涡流 30 s，将 EP 管置垂直于相混仪中室内温度影响2 h。将 EP 管放置到磁铁提取架内，聚集磁珠，弃上清液。 7)        加 1 mL 超去离子水于 EP 管上，充足混，用磁场架聚集磁珠，弃上清液。 8)        加 1 mL Storage Buffer（⑤）（打个比方含 0.05%叠氮化钠的 PBS 缓存液，或许买家跟据自行具体情况市场需求选靠谱的保存图片饱和溶液 ）于 EP 分液漏斗，彻底混合着，用ed2k架丰度磁珠，弃上清液。多个该操作流程 2 次。 9)        融入 400 μL Storage Buffer（⑤）于 EP 分液漏斗，做好混合型喂养，4ºC 存为应急。

注：**偶联淀粉酶的磁珠溶度为 25% (v/v)。