一、评述 NHS 滋养的琼脂糖磁珠（Magarose-NHS）将蛋清质简单的**地共价放置到磁珠的载体上，为抗原、抗原或任何微生物团伙结构的亲和纯化具备了有价值观的办法。滋养的琼脂糖磁珠包含就能够与蛋清质或任何团伙结构上的伯胺化学响应确立不稳定性的酰胺键的 N-羟基琥铂酰亚胺（NHS）官能团。藕合化学响应在 pH 7~9 的无胺保护液中展开。没有配体的团伙结构量或等电点（PI）藕合化学响应的工作效率均多于 80%。己经配体被放置，所提纯的琼脂糖磁珠既可以以被利用到重量亲和纯化环节中。  二、产品设备性能指标

食简称称	Magarose-NHS
中文字幕称呼	PNHS产甲烷的琼脂糖磁珠
磁珠浓度值	25% (v/v)  in ** 异丙醇
配基体积	~ 50 μmol NHS/ ml磁珠
材质	6%热塑磁块琼脂糖
粒级	20-45μm
配体配合	>20 mg IgG/ml磁珠
手机截图	2~8℃保护一年时间

注：磁珠球蛋白质根据量与关键球蛋白质特质有关于，这儿仅作考虑值。   三、运用技术

1. 缓冲液

全部的水和缓冲液均用 0.22 μm 或 0.45 μm 的滤膜进行过滤器。 ① Washing Buffer A: 1 mM 硫酸，操作前冷凝到 4ºC; ② Coupling Buffer A: 100 mM 2-吗啉乙磺酸 MES，pH 4.8（用做等电点超过 7 的生态学团伙的偶联）;

③ Coupling Buffer B: 200 mM NaHCO₃， pH 8.3（用于等电点大于 7 的生物分子的偶联）;

④ Blocking Buffer: 3 M 乙酸乙酯胺，pH 9.0; ⑤ Storage Buffer: 含产品品质总成绩为 0.05%叠氮化钠的 PBS 储存液亦或是随着客我自己要求所采用相关储存液。

 

2. 流程关键点

1)        其中的磁珠洗滌要严厉都按照阐明书适用闭式冷却塔的 Washing Buffer A（①）加快洗滌 ，尽可能的防止发动机组升温磁珠在洗滌时中 NHS 基团电离；

2)        蛋白偶联过程中，**要通过实验确定合适的 Coupling Buffer（主要包括 Coupling Buffer A（②）、Coupling Buffer B（③）、50 mM 硼酸溶液pH 8.5、100mM磷酸缓冲液，100mM NaCl，pH7.4这四种）；

3)        确保适合的的Coupling Buffer后，再与此Coupling Buffer 为框架，确保适合的的偶联球蛋白酶酶酶质酶渗透压，鉴于球蛋白酶酶酶质酶渗透压越高，偶联到磁珠上的球蛋白酶酶酶质酶的量会越大（这就是满足了到 NHS 基团跟球蛋白酶酶酶质酶偶联和 NHS 基团一种水解化学反应也是对相互竞争化学反应）。然而此页要综合性满足了应用功能和资金，有一些顾客偶联一少部分的球蛋白酶酶酶质酶便可满足了应用需求分析，此时运用低渗透压的球蛋白酶酶酶质酶便可，这类可大大减少资金。 4)        封密这一次能否应用3 M 乙酸乙酯胺，也促使用 Tris 保护液（100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0），封密时间间隔没法最低 2 h，但如果普通机械封密腰部景仍很高，还能否更多加一次 BSA 封密。  

3. 蛋白偶联操作步骤

一些作业的时候以取磁珠样本 400 μL，用到 1.5 mL EP 管概述介绍书。用户的可给出自业务需求按基数修改。

蛋白溶液配制：取适量待偶联蛋白用 Coupling Buffer 溶解，配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液。已经保存于 buffer中的蛋白，需要通过透析或者脱盐的方法彻底除去原有 buffer 里含伯胺基的物质，然后再用 Coupling Buffer 配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液，将配制好的蛋白溶液于4℃保存备用。

注： (1)为达标效果更好的耐腐蚀性，核血清质量浓度≥3.0 mg/mL，这种偶联能力会会高，在这儿需一体化选择成本费用和选用要； (2)核血清硫酸铜溶液中是不能包含有带伯氨基的含量，诸如 Tris，甘氨酸，明胶，BSA 等；   1)        取 400 μL 25%磁珠飘浮液于 1.5 mL EP 分液漏斗。磁转移，出掉上清液。 注：磁珠抽样前一定要老是相反、运用涡旋压缩机自激振荡器使其分层饱满，以确保实践的相同性，每取一些样须要如何混匀。 2)        加 1 mL 2~8℃的 Washing Buffer A（①）于离心分离出来管上，涡旋压缩机 15 s，使磁珠混后不均。将 EP 管放于带磁分离出来架内，丰度磁珠，取除上清液。 3)        加 200 μL 蛋白质溶剂于 EP 管内，涡旋式 30 s，使其搭配平均。 注：磁珠洗條后要即时引入蛋白酶水溶液。 4)        将 EP 管涡流式 15 s，置放斜面比调仪上，常温比调 2~4 h。倘若斜面比调不不光滑，则反应迟钝前 30 min，时间间隔5 min 卸下 EP 管涡流式 15 s。从此以后，时间间隔 15 min，卸下 EP 管涡流式 15 s。 注：请谅解必须也可以在 4ºC 想法留宿。 5)        使用永磁铁分开架含有磁珠，上传上清。加 1 mL Blocking Buffer（④）于 EP 管上，涡旋式 30 s，将 EP 管放至永磁铁分开架内，含有磁珠，弃上清液。 注：Blocking Buffer（④）除去化学微生物培养基盒中作为的 3 M 甲醇胺外，也就可以动用 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0 等别封端化学微生物培养基。 6)        加 1 mL Blocking Buffer（④）于 EP 管上，涡流 30 s，将 EP 管置铅直混合型喂养仪中环境温度响应2 h。将 EP 管居于磁体提取架内，生物富集磁珠，弃上清液。 7)        加 1 mL 超蒸馏水于 EP 分液漏斗，充分地混合物，用种子链接架聚集磁珠，弃上清液。 8)        加 1 mL Storage Buffer（⑤）（譬如含 0.05%叠氮化钠的 PBS 加载液，还是企业只能根据自己的现实的市场需求选好的存有盐溶液 ）于 EP 分液漏斗，积极主动相溶，用种子链接架聚集磁珠，弃上清液。按顺序该操作流程 2 次。 9)        添加 400 μL Storage Buffer（⑤）于 EP 管上，有效充分的混合着，4ºC 留存预备。

注：**偶联蛋白酶的磁珠含量为 25% (v/v)。