一、介绍 His-Tag 血清纯化磁珠（Magarose-IDA/NTA/TED）对於纯化 His 产品标签设计血清而研制成功的那种新兴纯化材质，有着**、高速 、快捷等优点和缺点，可按照磁分开途径就直接从生物工程样板中一方法流程纯化出高饱和度的对方血清，**地简化版纯化学化工艺和升高纯化率，非常适合科研课题和化工区域合理地做 His-tag 血清的纯化。差距常用的过柱层析纯化途径， Magarose NTA磁珠按照永磁铁分开途径纯化组氨酸产品标签设计血清，免对粗血清样板做频繁费时努力的离心分离、滤过方法流程，免装柱和过柱层析，免低廉的柱层析机 ，在1小时左右内便能合理地领取高产油量和高饱和度的必要性血清，且能随意保证多样化板相平行清理，**升高了运作率，尽可能有效降低了机 、时候和人工客服代价。 本食品类别有镍铁铁铁阴阳化合物（Nickel）和钴铁铁铁阴阳化合物（Cobalt）这两种废金属铁铁铁阴阳化合物螯合磁珠。它是在受众值蛋清质依照量及所获资金受众值蛋清质含量上带所之间的关系，一般的安利顾客动用的镍铁铁铁阴阳化合物螯合磁珠，太越多越情況下能能够满足顾客对蛋清质载量和含量的规定规范；对含量规定规范更快的顾客安利动用的钴铁铁铁阴阳化合物螯合磁珠。 His-Tag 淀粉酶纯化磁珠（Magarose-IDA/NTA/TED）磁珠范围广实应用在革兰氏阴性菌、鲜酵母、蜂类和辅乳動物组织等分泌或胞内表达方法的可阴离子型组氨酸商品标签淀粉酶各类性质发生变化淀粉酶的纯化。   二、成品性

的产种类称	Magarose-IDA/NTA/TED
常常种类	His-Tag 蛋白酶纯化磁珠
磁珠溶液浓度	25%（v/v）in 20% 无水乙醇
配基及密度计算公式	IDA or NTA or TED
媒质	6%化学交联磁体琼脂糖
粒度	20-45μm
配体紧密联系	30-40mg相结合蛋清/ml磁珠
另存	2~8℃存储2年

注：IDA联系容积高，耐螯合剂差；NTA联系容积较高，耐螯合剂最好；TED联系容积低，耐螯合剂**。     三、应用形式

1. 推荐的缓冲液
2. 可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

Binding Buffer: 20mM PBS, 500mM NaCl, 5~20mM咪唑, pH7.4;

Wash Buffer: 20mM PBS, 500mM NaCl, 20~100mM咪唑, pH7.4;

Elution Buffer: 20mM PBS, 500mM NaCl, 300-500mM咪唑, pH7.4;

1. 包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

Binding Buffer: 8M Urea, 50mM NaH₂PO₄, 100mM Tris·HCl, pH8.0;

Wash Buffer: 8M Urea, 50 mM NaH₂PO₄, 100 mM Tris·HCl, pH6.3;

Elution Buffer: 8 M Urea, 50 mM NaH₂PO₄, 100mM Tris·HCl, 300-500 mM 咪唑, pH4.5;

Note: Buffer 在用到前需注意 0.22 和 0.45 μm 滤膜过滤装置除菌。推送的 Buffer 组织体制支持于越多越组氨酸标记淀粉酶的纯化，在 Binding Buffer 中更改一定程度有机废气氨水浓度的咪唑可调低非非特异朋友依照，改善为的淀粉酶的色度。头回用到的潜在客户行主要包括推送的减慢液，再按照其实验报告后果适当的优化减慢液中的咪唑有机废气氨水浓度。  

2. 样品准备

2.1组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌下非变性条件下可溶性表达）

希释整体上市把你想表达出来爱的蛋清质：每克结肠杆菌菌体放入5~10 ml binding buffer重悬。原辅料和binding buffer含同一时间质量含量的咪唑可预防宿体生殖细胞把你想表达出来爱的含组氨酸的蛋清质。同一时间要清掉大粉末和高质量含量的螯合剂，如EDTA，组氨酸、檸檬酸等杂物，制止毁掉Ni-NTA硅橡胶。

1. 酶解：0.2 mg/ml 溶菌酶，20 μg/ml DNase，1 mM MgCl₂，1 mM PMSF（终浓度）或其他蛋白酶**剂。加入的**剂必须对磁珠无影响，4°C混匀30分钟。
2. 机械裂解：超声，均质，反复冻融等。
3. 调整裂解液的pH到7.4：不要用强碱或酸调节pH（防止沉淀）。
4. 裂解液离心：将液体转移到离心管中在室温或4°C 12000 rpm离心20 min，温度的选择取决于蛋白稳定性。
5. 收集上清准备进行后续实验，或是收集离心后的沉淀准备下一步实验。
6. 对于在酵母、昆虫及哺乳动物细胞系统中表达的蛋白，如果有大量的上清液可以用硫酸铵进行蛋白沉淀。用1X PBS透析，加入到磁珠中，如果样品中不含EDTA，组氨酸，柠檬酸等影响磁珠的成分，可直接上柱。

 

2.2组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌中包涵体表达变性条件纯化）

1. 用1×PBS悬浮细胞（每ml细菌沉淀约5 ml 1× PBS），按照上面的超声条件进行实验。
2. 裂解液在12,000 rpm离心10 min收集包涵体。用1×PBS洗涤几次包涵体。
3. 用Binding/Wash buffer溶解包涵体（每ml包涵体约5 ml Buffer），并在室温下孵育30~60 min。可能需要均质或超声将沉淀完全溶解。
4. 12,000 rpm离心30 min去除剩余的不溶物。小心的将上清转移到干净的管中而不触碰下面的沉淀。

 

2.3组氨酸标签蛋白纯化步骤

磁珠的使用的量由我们按照计划淀粉酶产出量和磁珠载量产品信息计算领取，这个以领取 5-10mg计划淀粉酶特征分析：

1. 磁珠准备：将Ni-NTA磁珠充分混匀，使用移液器取2 ml 的磁珠悬浮液，（磁珠沉降体积500μl）置于离心管中，磁分离，待溶液澄清，吸弃清液，加入ddH₂O反复清洗，去除酒精。
2. 磁珠平衡：加入5 ml Binding Buffer，反复吹打5-10次，磁分离，待溶液澄清，吸弃清液，重复洗2次。
3. 磁珠与目的蛋白结合：用10 ml Binding Buffer悬浮2 g湿重菌体，进行破损和裂解后，即为目的蛋白粗样，将粗蛋白破碎液加入磁珠，颠倒混匀。室温孵育15 min（如目标蛋白不稳定，置于2-8°C下孵育30 min）。
4. 洗杂：置离心管于磁分离器，待溶液澄清，移出上清液，保留以备取样检测。向离心管中加入10 ml Wash Buffer，反复吹打5-10次，磁分离，待溶液澄清，吸取上清液，保留以备检测。重复洗杂步骤3次以上。
5. 洗脱：用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度，加入2-10 ml Elution Buffer 加入到离心管中，重悬磁珠混匀，磁分离，待溶液澄清，吸取上清液，即为目的蛋白组分。重复上述步骤多次，分别收集洗脱组分并留样检测，以提高目的蛋白的回收量。
6. 磁珠后处理：加入5 ml Elution Buffer，重悬磁珠，磁分离，吸弃上清，重复该步骤2次。再用5 ml ddH₂O反复清洗3-5次。最后，加入2 ml 20%的乙醇溶液，使总体积等于初始磁珠悬浮液的体积，保存于2-8°C。
7. SDS-PAGE检测：纯化所得样品用SDS-PAGE 检测。
8. 磁珠再生：磁珠连续使用三次以上，其结合目标蛋白的能力可能会明显降低，建议进行磁珠再生处理。

Stripping Buffer: 20 mM Sodium Phosphate, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH 7.4 Washing Buffer（自选）: 0.5 M NaOH, 2 M NaCl

Recharge Buffer: 100 mM NiSO₄（该化学试剂有一定的毒性，可能造成过敏反应，使用时务必注意）以5 mL 10%（v/v）磁珠悬液为例，详细说明磁珠再生操作：

1)        将磁珠悬液磁分离，去除上清，在离心管中加入5 mL ddH₂O，重悬磁珠，磁分离去除上清液。

2)        进入5 mL Stripping Buffer，重悬磁珠，环境温度混旋5 min，磁破乳，我们要除上清液。从复此步骤之一1次。

3)        加入5 mL ddH₂O，重悬磁珠，磁分离去除上清液，重复此步骤 2次。

4)        碱处理：加入5 mL Washing Buffer，重悬磁珠，室温旋转混合5 min，磁分离，去除上清液。加入5 mL ddH₂O，重悬磁珠，磁分离，去除上清液。重复 ddH₂O洗涤步骤3~5次，至洗涤液呈中性。

5)        添加5 mL Recharge Buffer，重悬磁珠，环境温度翻转视频混20 min，磁块离，祛除上清液。 6)        成为5 mL ddH2O，重悬磁珠，吸引力离，洗去上清液。重覆此工作步骤4次上述，确认镍铝离子洗去根本。 7)        加进2ml 20%的无水乙醇盐溶液，使总体经济积=初使磁珠漂浮液的重量，保护于2-8°C。  

3．注意事项

1)         磁珠食用和存为期间中应预防速冻、烘干和高速收费站抽滤等进行操作； 2)         食用成品前一定更加充分振动使磁珠均匀的浮悬； 3)         磁珠与硫酸铜悬浊液混流程中，如硫酸铜悬浊液黏黏时未能够 摆动抽滤管重悬磁珠，可运用移液器老是吹吸或间歇漩涡混使磁珠积极重悬； 4)         消费者可利用实际情况应该补齐经带磁离心分离移去的上清液，进行制样论文检测，能够了解纯化全过程和调优核蛋白纯化流程步骤； 5)         本产品设备循环重复的便用的时建立纯化同类球核蛋白，纯化区别球核蛋白时，建立便用的新的磁珠，预防相交破坏； 6)        本新产品需与吸引力剥离器智能化施用； 7)        本化学试剂盒仅适用身体实验报告操作，不还可以适用诊疗、**和生物身体实验报告操作等，从此有的结果概不负责承担主责主责。