称谓：Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit

描绘：

Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酒曲单杂提升基），养成基以异常便捷应用的铝铂袋组织形式标签印刷箱，每一家独立性标签印刷箱应该配好的凉茶0.5 L的塑造基。便用时仅都要将袋中的大多数干粉导入到三角型瓶或塑造瓶中，加入到0.5 L的ddH2O，其次121 ℃杀菌15 min即刻。不要秤量和更改pH值。

实验性文件：

酒曲菌株：Y187（的缺陷什么是基因型his3-200、trp1-901、leu2-3）

因素媒介：pHis2-DNA（需求记号Trp数据基因遗传His）

文库质粒：pGADT7-cDNA（淘汰标记符号Leu）

工作工作步骤：

一、转成因素承载

1. YPDApad培育划线，碱化Y187酒曲茵种；挑酒曲菌落于溶液YPDA培养教育计划基摇菌培养教育计划；

2. 化学合成体验态并将pHis2-DNA转成到体会心得态内部；

3. SD/-Trp手机平板检查有效的转化结论。

二、自激活卡检则

1. 准备各不相同3-AT氨水浓度等度的SD/-His/-Trp华为平板电脑，3-AT的氧浓度似的更改在50-100 mM期间，并放置不标3-AT的对应；

2. 将给出转换副产物溶解到单克隆品质（OD值＜0.002），涂板。

3. 建立出宜的3-AT渗透压。（如某渗透压3-AT板式上的菌落弱小且稀松，与参考相比较差别分明，且延后培養时刻也不会会粉碎长，其为好的3-AT密度）

三、互作挑选

1. 夜体SD/-Trp激发基激发鱼饵菌株Y187（pHis2-DNA），制作Y187（pHis2-DNA）感觉到态组织；

2. 将pGADT7-cDNA文库转到Y187（pHis2-DNA）感想态神经元；

3. 转为终产物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp安卓平板各两块，什么的工具换算导出吸收率；所剩导出副产物彻底涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X为建立偶然所得盐浓度）平板电脑苹果50块（φ150 mm），训练3-5天；

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trpuv上克隆，PCR后（建议SK2420，菌P法），测序判定；

5. 点到点安全验证。

培养出来基调制形式：

1. 每袋致力于基干粉灌进三角形瓶或致力于瓶中，加0.5 L去化合物泥中溶于（琼脂冰水不溶）。

2. 无的调整pH值，121 ℃高压变压器无菌15 min。

3. 固体训练基封好口背光、环境温度处理紧急。

4. 液体培养出基冷去到50 ℃以上导入平板电脑，温度疑胶，密封倒放4 ℃维持。

3-AT的实用方法步骤：

1.测算流程平板电脑苹果的占比，调配塑造基；

2.制定3-AT的含量等度；

3.无菌建立的培养出基，待的培养出基保压到55 ℃以內，按布置浓硫酸浓度加如3-AT母液，摇匀后倒板；

4.标志所有板式的3-AT溶液浓度，超净台降温凝露后，将被转化产品涂板，28-30 ℃塑造3-5天。

供应信息设备文件：

1/2MGY培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母，也称MGAs） 2×500ml

1/2MM培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母） 2×500ml

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

2×MDH培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

5×AP培养基/APD培养基（含葡萄糖，-Ura） 100mL×5

5×AP培养基/APG培养基（含半乳糖，-Ura） 100mL×5

APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMGY & BMMY基础培养基 10×0.5L

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

PAD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.1L

RDH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RDH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

YPD/YEPD培养基（用于毕赤酵母）（溶液） 2×500ml

YPD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MDA培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MD培养基 10×0.5L

毕赤酵母MD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGYH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGY平板 （9cm）10个

毕赤酵母MMH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MM平板 （9cm）10个

毕赤酵母PAD平板 （9cm）10个

毕赤酵母RDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母RDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母RD培养基 10×0.5L

毕赤酵母RD平板 （9cm）10个

毕赤酵母筛选培养基套装（PichiaPink表达系统） 1Set

刚果红YPD平板（9cm） 10块

缺精氨酸APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

yyp2021.2.22