品牌：Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit

阐述：

Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（发酵粉单杂培植基），提升基以愈来愈简单方便动用的铝铂袋形态外包装方式，每家独力外包装方式能够制备0.5 L的培训基。操作时仅需用将袋中的整个干粉倒三边形瓶或培训瓶中，参与0.5 L的ddH2O，接下来121 ℃灭菌方法15 min如要。暂时无法秤量和修改pH值。

调查原材料：

酵母菌菌株：Y187（疵点基因组型his3-200、trp1-901、leu2-3）

诱惑形式：pHis2-DNA（选择标上Trp报告范文基因遗传His）

文库的载体：pGADT7-cDNA（淘汰标注Leu）

实验操作步凑：

一、有效的转化耳料的载体

1. YPDA手机平板训练划线，滋养Y187酒曲菌菌苗；挑酒曲菌菌落于溶剂YPDA陪养教育基摇菌陪养教育；

2. 提纯极其态并将pHis2-DNA还原成走进感语态神经细胞；

3. SD/-Trp平板电脑苹果检查流量转化报告单。

二、自刺激启动的检测

1. 制得区别3-AT盐浓度等度的SD/-His/-Trp平板等，3-AT的密度应该人设在50-100 mM之中，并装置不包含3-AT的差表；

2. 将以上应用有机物掺水到单克隆能力（OD值＜0.002），涂板。

3. 选择出宜的3-AT氧化还原电位。（如某氧化还原电位3-AT安卓平板上的菌落弱小且稠密，与差表想必对比非常明显，且拉长激发时段又不会再生利用长，仅以自然的3-AT溶度）

三、互作需求

1. 粘液SD/-Trp培養基培養耳料菌株Y187（pHis2-DNA），制法Y187（pHis2-DNA）感想态血细胞；

2. 将pGADT7-cDNA文库存入Y187（pHis2-DNA）感言态组织；

3. 生成生成物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp小米平板电脑各有块，用来算起转换有效率；其他转换终产物完全涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X为选择得到的密度）扁平50块（φ150 mm），锻炼3-5天；

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trp华为平板电脑上克隆，PCR后（强烈推荐SK2420，菌P法），测序评定；

5. 点到点印证。

致力于基调制方案：

1. 一小包养成基干粉倒进去角形瓶或养成瓶中，加0.5 L去铝离子水里溶于（琼脂凉水不溶）。

2. 无调节pH值，121 ℃高压变压器灭菌处理15 min。

3. 夜体致力于基封好口阴凉、常温贮藏后备电源。

4. 固体颗粒培养教育基保压到50 ℃左古放到华为平板电脑，高温凝露，封口处颠倒4 ℃永久保存。

3-AT的适用的方式：

1.计算方式要求平板手机的个数，配比培养教育基；

2.设计3-AT的氨水浓度等度；

3.高压蒸汽灭菌筛分陪养基，待陪养基冷却塔到55 ℃以內，按设定氧浓度加进3-AT母液，摇匀后倒板；

4.箭头4个安卓平板的3-AT溶液浓度，超净台冷却后妇科凝胶后，将生成产品涂板，28-30 ℃的培养3-5天。

产生物料的目录：

1/2MGY培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母，也称MGAs） 2×500ml

1/2MM培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母） 2×500ml

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

2×MDH培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

5×AP培养基/APD培养基（含葡萄糖，-Ura） 100mL×5

5×AP培养基/APG培养基（含半乳糖，-Ura） 100mL×5

APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMGY & BMMY基础培养基 10×0.5L

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

PAD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.1L

RDH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RDH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

YPD/YEPD培养基（用于毕赤酵母）（溶液） 2×500ml

YPD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MDA培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MD培养基 10×0.5L

毕赤酵母MD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGYH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGY平板 （9cm）10个

毕赤酵母MMH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MM平板 （9cm）10个

毕赤酵母PAD平板 （9cm）10个

毕赤酵母RDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母RDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母RD培养基 10×0.5L

毕赤酵母RD平板 （9cm）10个

毕赤酵母筛选培养基套装（PichiaPink表达系统） 1Set

刚果红YPD平板（9cm） 10块

缺精氨酸APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

yyp2021.2.22