萤火虫荧光素酶是一种个61kDa单亚基蛋白质含量质,酶催化活性不需全文翻译后遮盖(3,4)。因而，己经翻意达到即存在隐性基因组报告范文基因组的功能性。在ATP,Mg和 O产生下，顺利通过昆虫荧光素的氧化表现表现释放出激光(图1)。在中国传统反應经济条件下，荧光素的防氧化要路经一款 荧光素-AMP其中体，转化无比很慢。后果，这测量普通机械在底物和酶混后后带来种"闪亮"光，并更快衰减。在，普洛麦格集团公司在赢得申请的按量检测工具萤火虫荧光素酶特异性的化学药品里加入了辅酶A(CoA)，依据提高酶转变成(5)保证提高的生理反应驱流体动力学性，导致得出提升的"辉光"荧光电磁波(图2)。
海肾荧光素酶是一个个36 kDa单亚基血清质，纯化自自然生态界特征的Renilla reniformis"%) ,含有3%的碳水无机化合物。约局萤火虫荧光素酶，海肾荧光素酶的吸附性都不必须要 译员后呈现，当译员完全就可行驶遗传的通知单DNA的用途。海肾荧光素酶借助Oz和腔肠荧光素(coelenterazine)催化体现会亮体现(图1)。当应用领域DLR探测电化学操作的时，海肾荧光素酶的反應能源学产生辉光型荧光走势，并在精确测量整个过程中速度慢地衰减(图2)。
图1．由萤火虫和海肾荧光素酶所促使的生物技术带光体现
图⒉用双荧光素酶报告单DNA测量化学药品盒测量到的萤火虫和海肾荧光素酶存在的荧光。
在DLR在线检测体系中，萤火虫和海肾荧光素酶的化学活化是由不同裂解液中步測量的。在来完成萤火虫荧光素酶化学活化("研究"意见书人类基因)的量测后，萤火虫荧光被更快的淬灭，并你不在并且刺激启动海肾荧光素酶的荧光体现("相较比较”该报告染色体的化学活化)。之所以，DLR检查测量系统的终合了俩个检查测量化学反应，对出于转染组织上皮细胞裂解液或无组织上皮细胞转录/翻译英语不起作用中国共产党同表达方法的二个报告格式遗传基因高速地带来定量分析最终结果。
萤火虫荧光素酶查测的线性网络标准蔓延达酶溶度的8个大概的数重量级,可论文检测≤lfg(一般在10摩尔)的实验报告格式报告格式染色体酶(图3A)。用双荧光素酶报表什么是基因检查测量机系统，海肾荧光素酶的线型范畴达酶浓硫酸浓度的7最大数数据量，剖析汇报染色体酶加测的限度≤10fg(要花费3×101摩尔)(图3B)。前者，这多个酶表达的特情人渗透性同类。
用pGL3 -Control和pRL-SV40膜蛋白DNA共同利益转染CHO人体细胞(1×10°个生殖细胞/60mm培养计划).人体细胞用PBS洗條后,成为400ul的 PLB并刮下细胞膜，加工而成裂解液。分离出来 20ul 的内部裂解液，并将其和100ul的荧光素酶监测化学制剂II(LARII)混后，即时用荧光出现发亮计检测萤火虫荧光素酶的催化活性(绿线)。后来，在荧光亮光计试管内进入100ul的 Stop &GloTM采血管，以淬灭萤火虫荧光素酶表现，的同时成功激活海肾荧光素酶表现，并及时检测海肾荧光素酶的可溶性(蓝线)。此进行实验使用的Turner Designs规格型号20e荧光发光字计,结合台统计机来示踪在12几秒钟检验时段段内的荧光散发情况发生。
图3.萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶放光影响的波形标准。
纯化的萤火虫和海肾荧光素酶经包含的1mg/ml BSA的1xPLB响应液联续摇匀。适用配备有算出机的Turner Designs 荧光夜光计20e型，在经历过有一个初使2秒的预读延迟时间后，确保俩种荧光素酶在各项不同的氧化还原电位时，在10多分钟内的总荧光。
图4.用手掌动实操的荧光闪光计，或要配一只采血管进样器的荧光闪光计通过双荧光素酶加测的手段。
若果荧光放光计可配两个人进样器，则将裂解的产品的样品首先需要预包装到荧光放光计的试管内，马上又按次序手动填加LuciferaseAssay Reagent II(LAR I)和 Stop & GloTM生化试剂。
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