酶与抵抗能力交连的技术有众多种，可根据酶的架构各种有所差异可采取各种有所差异的技术。而对于备制 HRP整合物，可作戊二醛二步伐和过碘酸钠发。其中以简单的过碘酸钠法更加经常使用。
戊二醛二基本要领
1、的原理:戊二醛为一项双功能表化学制剂，利用其醛基对应与酶和免疫性抗体球球蛋白质上的氨基共价依照，转变成酶—戊二醛—免疫性抗体球球蛋白质依照物。
2、箭头布骤
(1）称取HRP25mg互溶12.5mL/L戊二醛稀硫酸中，于高温静置留宿。
(2)生理反应后的酶液体经SephadexG-25层析柱,用生理性茶水洗刷。空气流速把控好在1mL/min，自身棕的流出来液。如空间大于等于5mL，则以PEG萃取至5mL。存放25mL小烧杯内，慢慢的打料。
(3）将待图标的抗原112.5mg用顺利蒸馏水调制至5mL，拌和下逐滴入入酶稀硫酸中。
(4）用1M pH9.5碳酸盐缓解液0.25mL，延续拌和3~4每小时。
(5）加0.2M 赖氨酸0.25mL，混匀后，置制冷2每小时。
(6）在搅拌设备下逐加入适量入等体型大小呈现饱和状态磷酸铵，置4℃1钟头。
(7） 3000rpm/min抽滤 30min，弃上清。沉积物物用半是处于饱和状态硫酸钠铵洗分次，后面沉积物物溶水一点0.15M、pH7.4的PBS中。
(8)将据此盐溶液置入透析袋中，对0.15M、pH7.4的PB加载液透析，清除铵化合物后(用萘氏生化试剂论文检测)，10000rpm/min离心式30min除掉凝固，上清液就是指酶整合物，分开装袋后，急冻永久保存。
3、成果分辨
(1）界定及效价测定方法:用活性朋友抗原(或免疫抗体阳性）同酶记号免疫抗体阳性(或抗免疫检测球核蛋白抗原)作双线琼脂对外扩散现场实验或免疫检测电泳现场实验。而后用酶的底物使结晶弧显色，可逐项认定其活性酶类。后以就直接ELISA(或正式开启实验英文软件里)对酶运用物来滴定（见(三）工作上质量浓度的抉择)。
(2）婚姻法标示方法相比容易，多次性好，优缺点是酶的采取率低，通常只2%~4%的酶与球营养素结合在一起。
4、微生物培养基和仪器
( 1)0.1M、pH6.8聚磷酸盐抗震液(PBS):取0.2M Na2HPO4 49mL ,0.2M NaH2PO4 51mL,NaCl 1.8g，加分馏水至200mL。
(2) 12.5mL/L戊二醛液:取250mLL戊二醛50mL与 pH6.8的PBS确? mL交织。
(3) ;1M、pH9.5碳酸盐降低液(PBS):取 1M Na2CO3 3mL与1M NaHCO3 7mL混合着。
(4) 0.2M赖氨酸饱和溶液:称赖氨酸29.2mg溶水0.01M、pH9.5碳酸盐缓冲器液1mL中。
(5) 0.15M、pH7.4的PBS及生理学蒸馏水。
(6） pH7.8呈现达到饱和状态状态硝酸钠铵氢氧化钠液体及半呈现达到饱和状态状态硝酸钠铵氢氧化钠液体。
(7） 萘氏实验试剂及聚乙二醇(PEG、MW2000)
(8）纯化的活性聊天抗原或抗lg抗原。
(9）HRP(RZ>3.0)。
(10）SephadexG-25层析柱（2cmX50cm)。
(11）混和器、分光光度计、离心分离机。
(12）透析袋、大大小小烧杯，试管，吸管等。
比较简单过碘酸钠法
刑法是以NaIO4先将HRP的表面的含糖子阳极氧化成醛基,但是再与lg上的氨基相切合,所获酶标志抗体阳性的劳动生产率高,接近70%的HRP和Ig 联系,99%的Ig 与酶结合,酶与Ig的活力性无非常大的损毁,是现下通常用的最简单的方法.
1、原理图:**的过碘酸钠法中需主要采用二硝基氟苯半封闭HRP上留的a-和e氨基以避免出现酶原子核中间的化学交联。从前Wilson等换用在低 pH下使NalO4氧化反应HRP，于是除开了二硝基氟苯半封闭HRP步奏。HRP经NaIO4阳极氧化后生成的醛化酶可与抗原分子式的氨基连到，生成斯夫氏碱，前者可进步骤用兵NaBH(或甲醇胺）还原系统转换成安全稳定的酶标出表面抗原。
2、标记符号关键步骤
(1）称取5mgHRP溶化于1mL蒸溜水底。
(2）于上液里添加入0.2mL新配的0.1M NaIO4饱和溶液，环境温度下遮光搅拌装置207分钟。
(3）将以上所述溶剂装进透析袋，对1mM, pH4.4的冰醋酸钠保护液透析，4℃留宿。
(4）加20pL 0.2M pH9.5碳酸盐缓解液，使上文醛化物的pH提高到9.0~9.5，再完毕加如10mglgG，制冷背光悄悄的绞拌2天。
(5）加0.1mL新配的 4mg/mL NaBH4液，混匀，再置4℃2个小时。
(6）将作出氢氧化钠溶液置入透析袋，对0.15M,pH7.4PBS 透析，4℃隔夜。
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