FITC-D-Lys在细胞成像中如何使用?
一、打样定制配制与记号流程步骤
检测器降解与溶度操纵
降解制剂:推荐英文动用无血清养成基或 PBS(pH 7.4)析出 FITC-D-Lys,含量时间范围为 5-20 μM(会按照血细胞结构类型调准)。
DMSO 辅助的溶化:若融化有难度,可先用 DMSO 溶解完(终浓硫酸浓度 ≤1%),应对干扰神经元化学活化。
受损细胞孵育与标志
孵育必要条件:将神经元与 FITC-D-Lys 孵育(37℃,5% CO₂),时候大部分为 30 半小时至 2 h,重要需升级优化以取舍穿过速度与题材无线信号。
洗滌步驟:孵育后,用预冷的 PBS 干洗 3 次,取除未相结合的测试探针。
二、激光散斑性能指标与设备装置
荧光显微镜性能参数
增进吸光度:488 nm(选用激光行业或汞灯提高)。
反射光波长:520-535 nm(生态荧光渠道)。
瀑光时长:有效控制在 100-500 ms,以免光脱色。
共准确定位探讨(要选)
与其他细胞核器纺织染料(如 LysoTracker Red 标上溶酶体)共固色,认证 FITC-D-Lys 的人体细胞内市场定位。
食用共焦聚高倍显微镜 Z-stack 扫描仪扫描修改三维图影像数据统计。
三、应用领域应用环境与实验报告系统优化
应运方向盘 实践战略
蛋白激酶介导的内部摄取量 进行 LAT1 装运体(如良性肿瘤神经元系、血脑障壁内皮神经元系)分析 D-赖氨酸的被动运输管理机制。
分解代谢动态数据侦测 定时影像记录时间 FITC-D-Lys 在胞内的区域变动,探讨新陈代谢能量学。
螨虫細胞壁标出 将 FITC-D-Lys 构建至革兰氏阳性反应菌(如金黄的什么色提子球菌)的肽聚糖层,检查裂变位点。
四、要留意情况说明与优化提升提醒
后台警报抑制
快速设置未标示神经元的乱码对应,除掉自体荧光要素。
应用含 0.1% BSA 的洗滌液增多非特喜欢的人物理吸附。
活力性核验
按照 CCK-8 或 Calcein-AM 法鉴定检测器对体细胞活性酶的损害。
预防过多标出(改进措施 FITC/D-Lys 摩尔比 ≤1:15),处理众多致使荧光猝灭。
存储与稳固性
标示后的体细胞样品管理需阴凉上传,推荐影像前 24 每小时内达到标出。
FITC-D-Lys 冻干粉不断导出于 -20℃,逃避间断性冻融。
经典工作报告举例
癌症系三维成像:FITC-D-Lys 在 HeLa 細胞中呈线状分布区,与溶酶体共位置(pH 神经敏理性认可)。
沙门氏菌跟踪:标示后的金灿色巨峰葡萄球菌在裂变期表明方形荧光数据信息,輔助研发内部壁合成图片工作机制。
顺利通过出现方式方法,FITC-D-Lys 需用为高效性的工具调查癌细胞代谢转化、致病菌体染上及药品递送机理。