Sulfo CY3-DBCO，CAS:1782950-79-1制备成空心微针递送合成mRNA的文献分享

Sulfo CY3-DBCO（磺酸性反应CY3-DBCO）Sulfo CY3-DBCO 是一种种水阴化合物型荧光颜料，代替铜化合物随意的单击物理化学发应。它融合了Sulfo-CY3（磺过酸Cyanine 3，提高吸光度550 nm，试射吸光度570 nm）与DBCO（双环辛炔）功能性团，因此可与叠氮类材质采取迅猛、特情人的 SPAAC 发应（应力应变有助于的叠氮-炔单击发应）。是由于其磺酸基团怎强了水阴化合物型，Sulfo CY3-DBCO 无比适代替在丙烯酸乳液装修标准中标公示记淀粉酶、抗原、核酸和多糖原类叠氮修饰物。它在细胞系记号、活体三维成像、生态学制品共轭等论述中具备着多适用，更是适用于于不能不催化氧化剂的生态学制品装修标准中。

一、基本信息

名称：Sulfo-CY3-DBCO

中文名称：磺酸化CY3-DBCO荧光探针

CAS:1782950-79-1

分子量：889

性状：红色粉末

结构：

 

应用：

1、細胞标记符号和影像：将Sulfo-CY3 DBCO与包含叠氮官能团的怪物分子式式共价偶联，第二应用在細胞影像调查，交互某一怪物分子式式的地方和分布范围。2、脂肪酸质-脂肪酸质共同目的探析：Sulfo-CY3 DBCO要用于标注脂肪酸质，以探析脂肪酸质-脂肪酸质共同目的和数据环路。3、海洋海洋怪物工程感应器：制作碳原子测试探针和海洋海洋怪物工程感应器器，代替判断海洋海洋怪物工程模板中某些海洋海洋怪物工程碳原子的来源于和有机废气浓度发展。

文献：

文章来源：

//www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(18)30035-0

文章来源：

//www.cell.com/molecular-therapy-family/nucleic-acids/fulltext/S2162-2531(18)30035-0

作者：

Sonia Golombek ∙ Martin Pilz ∙ Heidrun Steinle ∙ Efrat Kochba ∙ Yotam Levin ∙ Dominique Lunter ∙ Christian Schlensak ∙ Hans Peter Wende ∙ Meltem Avci-Adali

摘要：

近些年里来，针对制作而成mRNA在癌受损神经组织细胞膜中加工必需外源淀粉酶的应该用愈来愈越根本。尽管，制作而成mRNA的浑身递送可能性引致非特喜欢的人摄取量到不都要的癌受损神经组织细胞膜或器管中，而使是没办法靶向制疗制疗必需的癌受损神经组织细胞膜。因为，制作而成mRNA的产品产品局部和靶向制疗制疗递送对于那些送达必需的癌受损神经组织细胞膜内型和结构就开始变得愈来愈越根本。在这一研究探讨中，探讨了在操作针对中空中微针育苗的形式完成制作而成mRNA皮内递送。不仅如此，建造了离体猪皮建模 ，以探讨皮内给药后皮肤组织组织中制作而成的mRNA介导的淀粉酶质把你想展现出来。在操作该建模 ，材料了制作而成mRNA的更高质量递送，这引致监测到由轻微育苗的制作而成mRNA识别码的高标准可分秘的人源化Gaussia萤光素酶（hGLuc）淀粉酶。与众有差异的是，在无转染制剂的情形下育苗的制作而成信使核糖核酸同时也会渗入癌受损神经组织细胞膜并引致淀粉酶质把你想展现出来。在就开始体內测试之间，建造的离体猪皮建模 需用于探讨皮内递送制作而成mRNAs后必需淀粉酶质的取得胜利加工。不仅如此，微针的在操作使制作而成mRNAs会友谊、无痛、更高质量地推送至深层中；因为，该形式需用于有差异皮肤组织组织病的产品产品局部制疗及其育苗疫苗育苗和免疫力制疗。 

方法：

合成hGLuc mRNA的Cy3标记

借助无Cu（I）（DBCO）点击进入化学工业对综合mRNA开展Cy3箭头。一方面，在IVT当天将5-叠氮基-C3-UTP掺量综合mRNA中，很快借助与DBCO-Sulfo-Cy3孵育将Cy3与5-叠氮基-C3-UTPs综合。对此，在IVT当天，动用1.9 mM 5-叠氮基-C3-UTP（谈起德国耶拿市耶拿生物工程学科我司）和5.6 mM伪UTP替代7.5 mM假UTP。只能根据加工商的这说明，动用RNeasy MinElute净化水后微生物培养基盒（QIAGEN）纯化IVT症状融合物。很快，在37°C下，将5-叠氮-C3-UTP突显的mRNA与总数为5倍摩尔吃太多的DBCO-Sulfo-Cy3（Jena Bioscience）一起去孵育1分种，用无核酸酶的水调节器。动用统计数据表换算DBCO-Sulfoo-Cy3的摩尔量与叠氮箭头的mRNA的量的社会关系。动用RNeasy MinElute净化水后微生物培养基盒（QIAGEN）立即纯化症状融合物，借助1%琼脂糖妇科凝胶电泳挪到温度（RT）下要1×GelRed在三硼酸EDTA（TBE）中脱色30分种来核实mRNA的溶解度。动用光度计校正氧浓度，并将mRNA永久保存在-80°C下。 

结论：

Synthesis of hGLuc-Encoding mRNA and Labeling with Cy3

hGLuc编码mRNA的合成及Cy3标记

可是，从而也能在皮内递送后检验生成的 mRNA，便用无 Cu(I) 的叠氮化物-二苄基环辛炔 (DBCO) 点开有机化学将 hGLuc mRNA 标示为 Cy3，里面 Cy3 大原子式结构在IVT后与生成 mRNA 中掺量的 5-叠氮基-C 3 -尿苷三磷酸 (UTP) 紧密融合。在图 1 B 中，便用太阳光的紫外线散发出仪能否清洗地看得见 Cy3 标示的 mRNA 带。在约 900 个碱基厚度处检验到*强的荧光卫星信号。可是，还能否看得见还的两个在 1.5 和 2 kb 处的弱带。出显若干 Cy3 标示带的根本原因会是紧密融合的 Cy3 大原子式结构的数据。每一 mRNA 的 Cy3 大原子式结构数据越多越好，大原子式结构量就越大。未加Cy3标示的mRNA经GelRed染色法后可清洗检验到，且与抗拉强度*高的Cy3标示的hGLuc mRNA出现同个超高。

 

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