巯基-透明质酸(HA-SH, MW: 70K)的合成方法和原料准备
巯基-透明质酸(HA-SH, MW: 70K)
巯基化半透质酸(Hyaluronic Acid Thiol, HA-SH)是将纯天然半透质酸(原子核量70,000 Da)加入巯基(-SH)掩盖的1种能力化多糖,于融合可热塑水疑胶、靶向药物载药程序或海洋生物物料掩盖。合成方法:
巯基化主要通过羧基活化与巯基小分子的接枝反应实现。以下是常见的合成步骤:
原料准备:
白色质酸钠盐(MW ≈ 70 kDa);巯基引进采血管:半胱胺硫酸盐、2-巯基乙胺、L-半胱氨酸等;碱化剂:EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)和 NHS(N-羟基蜜腊酰亚胺)。活化反应:
将HA溶于MES缓冲液(pH 5.5),加入EDC/NHS活化羧基,使其形成活性酯。
巯基引入:
加入巯基引入试剂(如半胱胺),在pH 6~7条件下缓慢搅拌反应12–24小时。反应过程中应避免氧化,可在氮气下进行。
纯化与冻干:
通过透析袋(分子截留约10kDa)进行除杂,冷冻干燥得到HA-SH产物。
注意事项:
巯基极易氧化物,应规避自然空气遇到;要加入DTT等还原成剂稳定性高巯基;巯基含量可使用Ellman’s法量测定法。应用方向:
广泛用于构建还原敏感水凝胶、金属纳米粒子包覆、多肽偶联载体、生物传感器等。
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