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生物
荧光标记氨基酸定制技术
一、概述
氨基酸的荧光标记广泛应用于蛋白质动态追踪、代谢示踪、酶活分析、信号路径研究等。通过对天然氨基酸或其衍生物进行荧光修饰,可构建荧光探针、标记底物或模拟肽链。
二、定制技术流程
1. 有机酸前体首选大自然酪氨酸如:Lys(有–NH₂)、Cys(有–SH)、Asp/Glu(有–COOH)延伸化碳水化合物(Fmoc-AAs、Boc-AAs等)2. 荧光活性染料与相连具体方法FITC → 反映Lys上的–NH₂NHS-Rhodamine/Cy5 → 胺基偶联Maleimide类荧光染剂 → 与Cys-SH症状EDC/NHS法 → 代替氨基与羧基两者的偶联3. 反應情况水或DMF安全体系化学反应pH管控在 7.4–8.5 左右不起作用周期:1~121天,闭光4. 纯化与进行分析纯化措施:透析、HPLC、层析研究技术:MALDI-TOF、荧光光谱图、NMR、MS三、应用
荧光酪氨酸用在体里分泌示踪荧光碳水化合物表达多肽创造出一个FRET检测器血清质方向修饰语或几丁质酶探测四、推荐试剂
生化试剂 | 模块 |
FITC、NHS-Cy5 | 大众化荧光标出物 |
L-Lysine、Cys、Fmoc-Lys(Boc)-OH | 可用碳水化合物底物 |
DMF、HEPES | 容剂模式 |
EDC、NHS | 酰胺键催化反应的作用剂 |
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