O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术-西安pg电子娱乐游戏app
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O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术
1. 技术背景
O-GlcNAc 为糖蛋白中常见的α-O-N-乙酰氨基葡萄糖修饰,用于研究蛋白质功能调控、信号转导、癌症与代谢疾病机制。可将O-GlcNAc定位于特定蛋白质构象或位置,以进行生化研究或靶向修饰。
2. 合成策略
电学羟基选定性乙酰化:将方向蛋白质或寡肽的Ser/Thr上羟基与GlcNAc-OH交叉耦合;N-羧基活性法:巧用GlcNAc-COOH活性为NHS酯,使其与蛋白质羟基或胺基偶联;酶促装饰:用到O-GlcNAc转入酶(OGT)在UDP-GlcNAc供体具备下开始酶离子液体的作用。3. 合成流程
获得GlcNAc-NHSUDP-GlcNAc水释怀磷滋养或电学制作而成建立GlcNAc-COOH,紧接着EDC/NHS滋养;蛋白质偶联反映在PBS缓冲器下(pH 7.5–8.0),GlcNAc-NHS慢慢放入关键球蛋白,温度1–2H;纯化透析或妇科凝胶过滤器(如Sephadex G-25)洗去徘徊修饰物;酶法要选OGT与UDP-GlcNAc共反应迟钝于20–37℃,酶溶度及底物的比例改进以抑制突显度;签别与定量分析灵活运用Western blot(抗-O-GlcNAc表面抗原)、MS(MALDI-TOF/LC-MS)认可修饰语的程度;能够糖硬度检验(如苯巴瑞蓝法)降钙素原检测装饰位点。4. 工艺节点控制
小于把控好体现摩尔比(1:1–1:10),尽量避免过快体现引响核蛋白催化活性;响应抗震因素(pH、环境温度)维护蛋白酶稳定可靠;OGT酶活降低配置文件如Mg²⁺、UDP-GlcNAc氨水浓度优化方案;阴凉运作可解决办法糖的可降解。5. 应用方向
O-GlcNAc位点能力的研究与网络信号环路详解;广泛用于PTM自我调节的球蛋白组学研究;与抗体阳性共轭去靶点评估平台网站勾勒;配制抗-O-GlcNAc狂犬疫苗侯选人抗原。规格:mg与g级别
产地:西安pg电子娱乐游戏app 生物
用途:科研
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