O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术-西安pg电子娱乐游戏app
生物
O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)修饰技术
1. 技术背景
O-GlcNAc 为糖蛋白中常见的α-O-N-乙酰氨基葡萄糖修饰,用于研究蛋白质功能调控、信号转导、癌症与代谢疾病机制。可将O-GlcNAc定位于特定蛋白质构象或位置,以进行生化研究或靶向修饰。
2. 合成策略
化学式羟基选取性乙酰化:将对象球蛋白或寡肽的Ser/Thr上羟基与GlcNAc-OH交叉耦合;N-羧基纯化法:根据GlcNAc-COOH纯化为NHS酯,使其与血清羟基或胺基偶联;酶促绘制:利用O-GlcNAc更改酶(OGT)在UDP-GlcNAc供体存在着下使用酶催化剂的的作用的作用。3. 合成流程
分解GlcNAc-NHSUDP-GlcNAc水摆脱磷滋养或生物学合成图片产生GlcNAc-COOH,接下来EDC/NHS滋养;血清偶联作用在PBS加载下(pH 7.5–8.0),GlcNAc-NHS变慢融入学习目标淀粉酶,常温1–2小時;纯化透析或凝胶的作用进行过滤(如Sephadex G-25)删去游离于修饰物;酶法自选OGT与UDP-GlcNAc共发生反应于20–37℃,酶浓硫酸浓度及底物百分比网站优化以保持遮盖度;签定与表现利用Western blot(抗-O-GlcNAc抗体阳性)、MS(MALDI-TOF/LC-MS)证实掩盖能力;能够 糖容重校正(如苯巴瑞蓝法)一定量突显位点。4. 工艺节点控制
精密调控突显摩尔比(1:1–1:10),避开优化突显作用球蛋白活性氧;反映加载标准(pH、温暖)持续血清安稳;OGT酶活加载引擎如Mg²⁺、UDP-GlcNAc浓度值优化提升;遮光控制可解决办法糖的光降解。5. 应用方向
O-GlcNAc位点技能深入分析与数据环路详细分析;采用PTM宏观调控的蛋清组学研究分析;与抵抗能力共轭参与靶向药物临床诊断公司建设方案;制取抗-O-GlcNAc预苗待选抗原。规格:mg与g级别
产地:西安pg电子娱乐游戏app 生物
用途:科研
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