Alexa Fluor 488 NHS 酯(AF488 NHS,常用用于蛋白质和多肽标记)是一种高性能绿色荧光标记试剂,广泛应用于生物化学、分子生物学、免疫学和细胞生物学研究。该化合物结合了 Alexa Fluor 488 荧光染料的优异光学特性与 N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯的高效共价偶联能力,使研究人员能够实现蛋白质、多肽及其他含氨基分子的稳定标记。AF488 NHS 的使用在荧光成像、流式细胞分析、免疫检测以及多通道荧光实验中具有广泛应用价值。
分子结构与化学特性
AF488 NHS 由 Alexa Fluor 488 核心荧光团和 NHS 酯官能团组成。Alexa Fluor 488 是一种改良型荧光染料,具有高量子产率、良好光稳定性和优异水溶性。NHS 酯是一种常用的羧基活化衍生物,能够与蛋白质、多肽或小分子中的自由氨基形成稳定的酰胺键,实现高效的共价偶联。AF488 NHS 结构稳定,可在保持分子功能的同时进行标记,避免对生物活性造成显著影响。
光学特性
AF488 NHS 属于绿色荧光染料,激发峰约为495 nm,发射峰约为519 nm。其亮度高、发射光谱窄、光漂白耐受性强,适合长时间成像和多轮荧光扫描实验。在多通道荧光实验中,AF488 绿色荧光可与红色或蓝色荧光染料组合,实现多指标同步检测。其高量子产率和水溶性使其在低浓度样品中也能获得清晰信号,适合定量分析。
蛋白质标记
AF488 NHS 可高效标记蛋白质中的赖氨酸残基,生成稳定的荧光蛋白。标记后的蛋白质可用于免疫荧光染色、Western blot、ELISA、免疫沉淀及流式细胞分析等实验。绿色荧光信号清晰,可用于低浓度蛋白检测和高分辨率成像。
抗体偶联
AF488 NHS 常用于抗体标记,制备荧光免疫探针或二抗。标记抗体在免疫检测中可提供高信噪比信号,同时远离细胞自身自发荧光的干扰。
多肽和小分子标记
AF488 NHS 可与含氨基的多肽或小分子偶联,构建功能性荧光探针,用于分子识别、受体定位、药物靶点研究及生物分子追踪实验。高效率偶联保证了探针的稳定性和实验可重复性。
活细胞和组织成像
AF488 NHS 标记的分子可用于活细胞成像及组织成像,绿色荧光在细胞内定位清晰,可与其他颜色荧光探针组合进行多通道实验。其光稳定性保证了长时间动态追踪实验的可靠性。