Cyanine5-PEG-Polylysine，CY5-聚乙二醇-聚赖氨酸的偶联反应
Cyanine5-PEG-Polylysine，CY5-聚乙二醇-聚赖氨酸的偶联体现
CY5-PEG-Polylysine 为将近红外荧光团（Cy5）通过聚乙二醇（PEG）连接至聚赖氨酸（poly-L-lysine，简称 PLL）的一类荧光标记阳离子聚合物，常用于基因递送载体、细胞标记和生物材料表面修饰。下述为可重复的合成与纯化流程要点与优化建议。
实验试剂与前体设计• 会选择 PLL 类型（分子式量比率熟悉为 3–70 kDa，或短寡聚赖氨酸 K10–K30）以所决定有电溶解度与血细胞相溶性。• 所用一边带碱化基团的 Cy5-PEG-X（X = NHS 酯、maleimide、DBCO 等），使用 Cy5-PEG-NHS 适用于与赖氨酸 ε-NH2 偶联；PEG 的长度（PEG-500–PEG-5000）据亲水性聚氨酯/环境隔离防晒需要选择。偶联化学反应（关键前提条件）• 稀释剂与减慢：在避开胺类干扰信号的磷酸緩冲（PBS pH 7.4）或碳酸氢盐减慢（pH 8.0–8.5）中实施。若水解性不足，适用一定量 DMSO/DMF 作辅助稀释剂（总体经济稀释剂分量 <10%）。• 摩尔比与高温：的控制 Cy5-PEG-NHS : PLL 的当量以干预记号度（DOL）。经常用当量 0.1–1.0 eq（以赖氨酸残基计）应用在低记号度，或 1–5 eq 应用在高记号度。发应在 0–4°C 到在常温遮光 30 min–4 h，短暂间这会有利于减低热塑。• pH 控住：NHS 酯在 pH>9 易水解反馈，pH 7.5–8.5 为佳；若应用 maleimide，需要 pH 6.5–7.5 以防止出现胺类副反馈。结束与我们要除未生理反应生化试剂• 撤消：加进甘氨酸或乙酸乙酯胺（10–50 mM）撤消剩下的 NHS 酯想法。• 大概清理：顺利通过透析（为宜 MWCO）、反渗透膜（Amicon 膜，MWCO ≥ 缔合物原子量极限值）清理解离 Cy5-PEG 小原子及低原子硫氰酸盐；若体系建设含 DMSO，先希释以便膜分离处理。纯化方法（可整合在使用）• 尺寸规格排阻色谱（SEC/GPC）：除掉分低子染剂并破乳多种标示度的物品。对提氧分子 PLL 使用 Superdex/Sepharose 系塑料填料。• 透析与离心法净化：生产成本费用低、易放小，采用出掉小原子与有机溶剂交流。• 阴离子互转色谱（IEX）：采用 PLL 带正电的特点离心分离多种转变度物质（在恰当 pH 变动整表面层电荷量异同）。• RP-HPLC：不惯用于涨分子式，但对短寡聚物或分不高散产品的样品是涨区分考虑。表现与效率把握• 吸取/荧光光谱仪：记录查询 Cy5 吸光峰（约 650 nm）与荧光卫星发射谱，估算标出度（DOL = (A650/εCy5) / (A280 − A650×CF)/εprotein）。• SDS-PAGE（荧光复印 + 复染）：查测共价融入、聚集地或可降解段落（关注抓原子跑板性状）。• GPC/SEC（配 UV/RI 检查）：考核分子式量分布范围与聚在一起。• MALDI-TOF 或 ESI-MS：若氧大团伙量同意，询问氧大团伙量与绘制数；对高氧大团伙能作场面/挥发副产物定性分析。• 核磁（1H NMR）：观擦 PEG 和末段基团数据信号（在分太低子 PLL/寡聚物时有效性）。普遍话题与简化要领• 神经太过紧绷标记符号形成胞毒或聚积：原则从低 DOL 已经，迅速优化提升。• 交连与可视化交互生理生理反应：调整化学活化微生物培养基当量与生理生理反应的时间，以免 低温与强酸强碱。• 溶化性问題：酌情会选择 PEG 直径或用盐/溶液缓解。• 标记符号稳固性：厂品背光、低溫存有，储存中要加入剂（极少量抗坏血酸或 BHT）。产品名称：Cyanine5-PEG-Polylysine，CY5-聚乙二醇-聚赖氨酸
纯净度：95%+相对性状：液态物质或液态物质贮存條件：-20°C缺水阴凉上传包装方式规格尺寸：50mg 100mg 250mg 500mg（按需作为）产家：pg电子娱乐游戏app 生态学
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