CY7.5-Angiopep-2，远红外荧光肽探针的合成步骤
CY7.5-Angiopep-2，远红外荧光肽测试探针的分解成步数
CY7.5-Angiopep-2 是将Angiopep-2（序列：TFFYGGSRGKRNNFKTEEY，19 aa）与近红外染料 Cy7.5 共轭得到的远红外荧光肽探针。Angiopep-2 来源于 Kunitz 域，能与低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP-1）结合，通过受体介导的跨胞吞作用帮助分子穿越血脑屏障（BBB），常被用作将药物或示踪团递送至中枢神经系统的配体。
Tocris BiosciencePMCCy7.5 火箭发射坐落在近红外区，可在组织安排自发性荧光低游戏 背景下供给高精准走势。将有机染色剂确认其他化工手法（NHS 酯与肽的 N 端或 Lys；maleimide 与 Cys；单击化工确认 azide/alkyne）与 Angiopep-2 共轭，可获到其他链接方试的生成物以足够生物工程学效能与构象安全稳定量分析的条件。要想增多有机染色剂对肽感觉根据或跨膜运输催化活性的干拢，常带来韧性间距（β-Ala、PEGn、AEEA）并把控有机染色剂与肽的记号度（DOL ≈ 0.8–1.0）。分析方法主要包括 RP-HPLC（C18，梯度方向），ESI-MS / MALDI-TOF 查验分子式量，UV-Vis/荧光谱图法测活性染料融合与发射成功峰并估算 DOL；有必要的时用 DLS / SEC 检则聚积态。原料以冻干粉或含一定量抗腐蚀/固定剂的加载液留存，闭光、-20 ℃ 长时间留存。分解成进行（约460字）设计制作与保证机制：选定共轭位点（熟悉：N-terminal α-amine、侧链 Lys、或在 C-terminus/N-terminus 外部 Cys）。如果需要 Lys 位点决定性箭头，可在固相获得时施用 Lys(Mtt/ivDde) 做正交保证；如果需要巯基偶联则在回文序列末段或时间间隔形成 Cys(Trt)。为拉低染色剂扰动，建议大家在箭头位点与实用功能域期间形成 6-12 水分子直径的 PEG（列如 AEEA 或 PEG3/PEG6）或 β-Ala。固相肽分解成（SPPS）：在 Rink amide 或 Wang 不饱和树脂上主要包括 Fmoc 化学想法自 C 端向 N 端分解成 Angiopep-2。任一步用 HBTU/HATU + DIEA 或 DIC/Oxyma 偶联；对难解耦位点能加倍偶联或缩短想法时间间隔。侧链保護是以常规检查（Asn/Arg/ Lys/等分别用根据保護基团）。到位分解成后若利用正交保護（举个例子 Lys(ivDde)）必须要在适宜前提避开该保護以开始水溶液相标注。裂解与粗制备：用 TFA/水/三异丙基硅烷（95:2.5:2.5）或等效裂解液裂解并去侧链保護，冷乙醚水解粗肽。粗品可根据 C18 固相提取清理大局部溶解性/低性硫氰酸盐。染色剂碱化物的准备与偶联：选用方式：NHS 酯法：若记号 N 端或 Lys，融化肽于碳酸氢盐储存（pH 8.0–8.5）或轻微有机酸容剂混合式液（DMSO），将 Cy7.5-NHS（1.1–1.5 当量）注入，常温背光不良反应 30–120 多分钟。为抑制性肽群聚可注入 5–10% HFIP、0.01–0.05% Tween-20 或低氧浓度磷酸二氢钾。Maleimide 法：若肽含 Cys，先用 TCEP 展现（1–5 mM，pH 6.5–7.0），接着与 Cy7.5-maleimide（1.1–1.2 当量）在常温下发生不良反应 15–60 小时，尽量不要是碱性的水平以免止 maleimide 蛋白质水解或胺侧发生不良反应。打开催化：若的使用 azide/alkyne 性能团，先在固相或溶剂相安装响应手柄，在用 CuAAC 或 SPAAC（无铜）前提与 Cy7.5-alk/azide 联系（考虑铜或者决定荧光/蛋白质含量质，有必要的时用恢复原剂与螯合剂抑制）。纯化：反馈后用 RP-HPLC（C18，等度 5→60% ACN w/0.1% TFA，空气流速与柱型视企业规模而定）拆分单标识副产物。收藏相应的峰，冻干到 TFA 盐行驶纯肽。表现：用 ESI-MS 或 MALDI-TOF 核实原子核量；用 UV-Vis（判定染剂吸引峰并算 DOL）与荧光光谱图检测的发射成功基本特征；RP-HPLC 应用于含量开展（≥95% 精选）；如需开展特点性，可做离体人体细胞构建/内吞进行调查或 LRP-1 行业竞争构建进行调查产品名称：CY7.5-Angiopep-2
纯净度：95%+物理性质：粉状或粘液贮藏经济条件：-20°C干燥的阴凉导出包装机要求：50mg 100mg 250mg 500mg（按需给出）生产商：pg电子娱乐游戏app 生物学
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