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5-diacetate FAM NHS 是一种广泛应用于生物化学和分子标记的荧光试剂,其核心为荧光素(FAM),末端经NHS活性酯化处理,并用乙酸酯保护羟基,提高稳定性与可操作性。这种结构设计兼顾了荧光性能与化学修饰的灵活性,适用于蛋白质、肽和其他氨基含量丰富的分子标记。
化学结构与性质
FAM荧光染料核心
FAM是一种绿色荧光素,具有良好的光稳定性和高量子产率,吸收光波长约495 nm,发射光波长约520 nm。其共轭芳香体系提供了强烈且稳定的荧光信号,可用于定量分析和可视化检测。乙酸酯保护基
分子中的羟基通过乙酸酯保护,提高了化学稳定性并防止在存储或操作过程中发生非特异性反应。在特定条件下(如水解或酶作用),保护基可以被去除,恢复FAM的活性,用于特定标记策略。NHS活性酯
NHS(N-hydroxysuccinimide)酯是一种高反应性官能团,可与蛋白质或肽链中的氨基形成稳定的酰胺键。这一特性使5-diacetate FAM NHS能够实现高效且可控的共价连接,是生物分子标记的重要手段。
应用领域
蛋白质及肽标记
5-diacetate FAM NHS通过与氨基反应,可在不破坏蛋白质整体结构的前提下,将荧光标签引入分子体系,实现分子追踪和定量分析。探针构建与功能化分子
该化合物可用于构建荧光探针和功能化分子,如与链霉亲和素、生物素偶联物或药物分子结合,形成多功能分子工具,用于成像、检测或活体追踪研究。生物分析与成像研究
荧光标记后的分子可以通过荧光显微镜、流式细胞仪或荧光板读数仪进行检测,实现蛋白质相互作用分析、细胞内定位研究或分子动力学分析。
使用注意事项
反应条件:NHS酯对水敏感,应在干燥缓冲液中进行标记,pH一般控制在7–8,以保证反应效率。
储存:低温避光干燥保存,避免湿气和高温,防止活性丧失。
安全性:操作时佩戴手套和护目镜,避免接触溶液或固体,注意有机溶剂安全。