AF594 Tyramide 是一种高性能荧光标记底物,常用于分子生物学和生化分析中,特别适用于信号放大技术(Tyramide Signal Amplification, TSA),在免疫组织化学 (IHC)、原位杂交 (ISH)、Western blot 等实验中应用广泛。AF594 属于 Alexa Fluor 系列染料,其吸收峰约为 590 nm,发射峰约为 617 nm,呈现明亮的红色荧光。
化学结构与性质
AF594 Tyramide 是通过酪胺(tyramide)与 Alexa Fluor 594 荧光染料共价连接形成的化合物。酪胺分子具有酚羟基,可以在过氧化物酶(如 HRP, 辣根过氧化物酶)催化下生成自由基,并迅速与邻近蛋白质或多糖分子上的酪氨酸残基形成共价键。这种特性使 AF594 Tyramide 成为信号放大技术的理想工具。化学性质稳定,常温下储存即可长期保持活性;其良好的水溶性使其可在 PBS、Tris 缓冲液或 DMSO 中溶解,便于在多种实验体系中使用。
应用原理
AF594 Tyramide 的主要应用是酶介导的信号放大。在实验中,目标分子首先通过特异性抗体或配体与 HRP 相结合。加入 AF594 Tyramide 后,HRP 催化酪胺产生自由基,自由基迅速与目标区域邻近的蛋白质结合,形成高密度荧光标记。这种方式显著提高信号强度,使低丰度目标分子也能够被检测。AF594 的红色荧光特性与绿色或蓝色荧光染料形成明显光谱分离,便于多重标记实验中实现多目标共定位分析。
使用注意事项
AF594 Tyramide 应避光保存,并避免高温环境。实验条件(如 HRP 浓度、孵育时间、温度和缓冲液组成)需根据目标和样品类型优化,以获得信噪比。使用完毕后,应妥善处理残余试剂,避免影响实验环境或样品。操作中尽量避免反复冻融,以保持染料的荧光性能和化学活性。