AF405 二苯并环辛炔，AF405 DBCO的炼制步数综述

AF405二苯并环辛炔（AF405 DBCO）是一种功能性荧光标记试剂，由Alexa Fluor 405荧光核心和二苯并环辛炔（DBCO, Dibenzocyclooctyne）官能团组成。Alexa Fluor 405是一种蓝色荧光染料，激发峰约为402纳米，发射峰约为421纳米，具有高量子产率、光稳定性良好和荧光强度高的特点。DBCO官能团是一种应答点击化学（copper-free click chemistry）的环炔结构，能够与叠氮基团（azide）高选择性地发生环加成反应，实现生物大分子的温和共价偶联。AF405 DBCO因其高选择性、温和反应条件和强荧光信号，在生物分子标记、荧光探针构建、细胞成像及药物递送系统研究中具有广泛应用。

合成视频进行详述AF405 DBCO的结合基本有荧光团结合、官能团联系、纯化表现八个注意时期。之下为结合阐述：

1. 荧光核心的制备
   首先合成Alexa Fluor 405核心分子。荧光团核心通常由多环芳香结构组成，通过适当的取代基修饰来增强量子产率、水溶性和光稳定性。在核心合成过程中，需控制反应条件如温度、溶剂和反应时间，以确保分子结构完整，并保留用于进一步偶联的功能基团（如羧基或氨基）。

2. 官能团引入——DBCO连接
   荧光团合成后，通过活化羧基或氨基的方法，将DBCO官能团连接至荧光核心。常用的策略包括使用活化酯（如NHS酯）或其他可逆保护基团，以保证DBCO的环炔结构不被破坏。反应通常在极性有机溶剂（如DMSO或DMF）中进行，并在温和条件下完成，以避免荧光团降解或DBCO环炔开环。

3. 偶联反应控制
   在DBCO连接过程中，需要控制摩尔比和反应时间，以获得单一连接产物并避免多点偶联。通过适当选择溶剂体系和缓冲条件，可以提高反应效率，并减少副产物生成。温和反应条件不仅保护荧光团光学性能，也保证DBCO的反应活性和结构稳定性。

4. 保护基去除（如有）
   如果在DBCO或荧光团连接过程中使用了保护基（例如氨基或羧基保护基），需在反应完成后进行去保护处理。去保护步骤通常在温和酸性或碱性条件下进行，以避免荧光团降解和DBCO环炔开环，确保最终产物功能完整。

5. 纯化步骤
   合成完成后，需要去除未反应的起始物、副产物及溶剂残留。常用的纯化方法包括：

• 高质量色谱仪色谱（HPLC）反相C18柱提取，经过均值冲洗掉完成的目标代谢物与其它杂物的提取。

• 硅胶柱层析，用于实验室规模初步纯化，结合荧光检测快速识别目标产物。
  纯化后的AF405 DBCO通常为干粉形式储存，避免水分和光照对荧光团和环炔结构的破坏。

1. 表征与质量验证
   最终产物需进行结构和光学性能表征，包括：

• 核磁振动（NMR）根本碳原子构成和官能团联系原因；
• 质谱（MS）判定大大分子量和大大化学结构式；
• UV紫外线-内见光谱仪分析（UV-Vis）和荧光光谱仪分析核验荧光能及消化导弹主波长；
• 薄层色谱（TLC）尽快测评溶解度。

1. 应用准备
   纯化和表征完成的AF405 DBCO可用于后续生物偶联实验，例如与叠氮化物修饰的蛋白质、核酸或纳米载体进行温和点击化学反应，实现高选择性、可控的荧光标记。由于DBCO点击化学为无铜条件下的反应，适合活细胞或敏感生物体系使用。

产品名称：AF405二苯并环辛炔

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