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Sulfo Cy5.5 NHS ester 磺化修饰的近红外荧光染料标记蛋白的操作指南
发布时间:2025-12-10     作者:zhn   分享到:
Sulfo Cy5.5 NHS ester 是磺化装饰的近红外荧光有机染料活性氧发展物,因高水可溶和高品质荧光性能,适用于生物技术氧分子标识等科学3d场景,左右是详情好产品指引:

基础参数

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核心优势

水阴离子型佳且怪物相匹配性好:磺化体现使其带负电,既能在水相近应工作体系直观施用,暂时无法生态学碳高沸点溶剂助溶,还能解决标签后影起血清质等怪物原子核疏水性聚氨酯聚众,保护标签物品稳定性高。记号特女性朋友强:NHS 灵活性酯基团可在一个温和先决条件下,与蛋白酶质、表面抗原、多肽等生物技术分子式的伯氨基特女性朋友反响组成稳定可靠酰胺键,记号转化率高。自适应近红外研究方案:发激发光谱占据肌体策划 近红外任务栏,生物学策划 击穿性强,且该股票波段题材荧光串扰低,光安全稳界定好,适用于长時间激光散斑查看。使用场所最常见于活体近红外影像、免疫性荧光判断、免疫印迹細胞解析等。譬如箭头細胞膜淀粉酶推动多巴胺受体内吞间歇的实时路况探测,修饰语脂质体等nm的载体以查看口服药摄取量路径名,也快速可用于細胞迁出细分探测、多色免疫印迹細胞分选等研发场所。


使用与储存要点

实用:用 0.1M 磷酸缓存数据液(pH8.3 - 8.5)是 不起作用体系中,减少含氨基的 Tris 缓存数据液;染剂溶解于无水 DMSO 后溶解稀释实用,染剂与关键氧分子摩尔比意见与建议 4 - 12:1,不起作用在室内温度或 4℃下实行 30 - 60 半个小时,事件用 1M Tris - HCl 中止不起作用,按照凝胶的作用色谱等手段纯化产品。贮藏:必须要在 - 20℃、非常干燥闭光工作生活环境下永久保存,所处氦气等惰性汽体工作生活环境;產品应用前需常温回温 20 15分钟上文,预防过多解除冻结,以免活性酶类下滑。  

下面是Sulfo Cy5.5 NHS ester 标记蛋白的操作说明

Sulfo Cy5.5 NHS ester 是磺化遮盖的近红外荧光染剂,因高水可溶性和特女性朋友氨基标签本事,大面积使用于蛋白酶荧光标签,下为规范化实际操作技巧步骤及提前准备项目:

1、实验前准备

免疫试剂与的耗费材料待标记图片蛋清(如抗原、白蛋清,需保证 色度>90%,浓度值≥1mg/mL)Sulfo Cy5.5 NHS ester 纺织染料(-20℃背光留存,食用前常温回温)缓存数据液:0.1M 磷酸二氢钠缓存数据液(PBS,pH 8.3-8.5,没含氨基)、1M Tris-HCl(pH 7.4,应用在撤消不良反应)办公耗材:背光抽滤管、移液枪及无酶吸头、抑菌凝胶滤过柱(如 PD-10)或反渗透装置管(3kDa/10kDa)预进行实验加工对标上蛋清开始储存液更换,清除原模式中的氨基(如 Tris、甘氨酸),可根据超滤膜或妇科凝胶脱盐完成任务,保证蛋清悬浮物于 0.1M PBS(pH8.3-8.5)中。染色剂溶解度:取适当 Sulfo Cy5.5 NHS ester,用无水 DMSO 配置成 10mM 母液(现配在用,尽量避免长用时外露于热空气和日照时间)。

2、标记反应操作

摩尔比决定好不同球球核球蛋白碳原子量和氨缴费基数量,决定好染色剂与球球核球蛋白的摩尔比,通常比列为4:1~12:1(小碳原子球球核球蛋白取低比列,抵抗能力等大碳原子取 6:1~12:1,预防适度记号产生球球核球蛋白聚集地)。不起作用采集体系调配在背光离心法管上引入血清溶剂,很慢加入适量调配好的纺织染剂母液,缓缓弄反混匀(减少阵发性振动出现血清性质发生变化),确保安全纺织染剂平滑分布。孵育影响将影响安全体系放入恒温阴凉前提水平下孵育 30~60 一分钟,若为对水温太敏感的蛋白酶,可在 4℃前提水平下延缓孵育至 2 一小时,全部解决太阳光。中止反馈向标准体系里加入 1M Tris-HCl(终渗透压 50mM),制冷孵育 10 小时,中止未反馈的 NHS 活力酯基团。

Sulfo Cy5.5 NHS ester

3、标记产物纯化

妇科凝胶的作用过滤程序水法采取 PD-10 妇科凝胶的作用过滤程序水柱,用 PBS 动态平衡柱子后上样,搜集第一点冲洗掉峰(含标记符号球蛋清),弃去以后散布染色剂峰,该形式实应用于大部门球蛋清的高效纯化。反渗透装置法采用相对应公款私存原子量的反渗透装置管,参加反馈液后 12000rpm 离心式式,弃去滤液(含悬浮活性染料),向公款私存液中补点 PBS 重覆离心式式 3 次,终将滤液无显著的荧光,适适合用高氧浓度淀粉酶的精浓与纯化。

4、标记效率检测与储存

能力检则凭借UV紫外线分光光度算分别测量 280nm(血清有特点消除峰)和 678nm(活性颜料有特点消除峰)的吸光度,会根据计算的公式计算的活性颜料 / 血清紧密结合比(D/P),自然 D/P 参考值 2~5,过高易引起血清缩聚。生产设备存有纯化后的箭头蛋清可分开装袋存有于 - 20℃或 - 80℃闭光情况,而短时间内实用可 4℃冰箱,预防一直冻融,实用前需复温至制冷并缓缓的混匀。

5、注意事项

作用指标体系 pH 需从严操控在 8.3-8.5,pH 过低会降 NHS 酯特异性,pH 过高易导至颜料溶解没用。全线进行需背光,必免活性染料荧光淬灭,损害标识郊果。若蛋清含解离巯基等活力性基团,需尽早全封闭,规避非特情人组合。