荧光标记凝集素定制技术
荧光标记凝集素定制技术
一、技术背景
凝集素(Lectins)是一类能特异性识别糖链的糖结合蛋白,广泛用于细胞表面糖基识别、糖组学研究、肿瘤分型、病原体检测。通过荧光染料标记凝集素,可用于细胞成像、组织定位、糖链分布分析等领域。
二、标记染料与选择
颜料内型:FITC(绿)、Cy3(橙)、Cy5(红)、Alexa 488/594;标示步位:血清质上的赖氨酸残基(氨基);利用NHS化学活化酯型荧光染色剂主导。三、标记流程
球蛋白准备工作:将凝集素溶解出来于PBS减慢液(pH 7.4~8.0);淀粉酶溶液浓度约1–5 mg/mL。碱化纺织染料增添:NHS酯有机染料溶解DMSO,很慢中滴加至蛋白质盐溶液中;在闭光先决条件下高温现象30–60分鐘。出掉存在染色剂:动用Sephadex G-25凝胶的作用柱脱盐;或选取透析、离心式反渗透装置方式 。的质量检查:运用太阳光的紫外线分光法判定标记图片有效率(A280 & Amax);保证质量标示比率在1–3 mol/mol核蛋白左右。四、应用方向
糖链地位与新动态论文检测(如恶性肿瘤糖链、胚胎发展);细胞膜掌握、生物制品数据推送研发;与nm形式共装饰建设靶向疗法装置;多大免疫检测荧光刺绣与聚集疾病进行分析。
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